[發明專利]二維培養系統在小鼠腸上皮干細胞體外培養中的應用有效
| 申請號： | 201810387390.0 | 申請日： | 2018-04-26 |
| 公開（公告）號： | CN108588010B | 公開（公告）日： | 2022-03-08 |
| 發明（設計）人： | 陳曄光;劉媛;亓振 | 申請（專利權）人： | 清華大學 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 趙天月 |
| 地址： | 10008*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 二維 培養 系統 小鼠 上皮 干細胞 體外 中的 應用 | ||
1.一種培養系統，其特征在于，所述培養系統用于單層細胞培養，所述培養系統包括：基質膠、N2、B27、雙抗、0.5-10mM GlutaMAX、0.2-5mM N-acetylcysteine、100-1000ng/mLR-spondin 1、2-10μM Blebbistatin以及基礎培養基，
所述培養系統進一步包括Noggin以及LDN-193189的至少之一；所述Noggin的濃度為5-200ng/mL；所述LDN-193189的濃度為0.1-2μM，
其中，所述基質膠的厚度均一為10μm。
2.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述基礎培養基為Advanced DMEM/F12。
3.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述細胞為干細胞或表皮細胞。
4.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述細胞為腸干細胞或腸表皮細胞或胃干細胞或胃表皮細胞。
5.根據要求要求4所述的培養系統，其特征在于，所述細胞為腸干細胞。
6.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述GlutaMAX的濃度為2mM。
7.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述N-acetylcysteine的濃度為1mM。
8.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述R-spondin 1的濃度為1μg/mL。
9.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述Blebbistatin的濃度為10μM。
10.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述培養系統進一步包括EGF，所述EGF的濃度為5-100ng/mL。
11.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述EGF的濃度為50ng/mL。
12.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述Noggin的濃度為100ng/mL；所述LDN-193189的濃度為0.5μM。
13.根據權利要求1所述的培養系統，其特征在于，所述培養系統進一步包括LDN-193189和/或GSK3抑制劑；所述LDN-193189的濃度為0.1-2μM。
14.根據權利要求13所述的培養系統，其特征在于，所述LDN-193189的濃度為0.5μM。
15.根據權利要求13所述的培養系統，其特征在于，所述GSK3抑制劑為CHIR-99021或LY2090314。
16.根據權利要求15所述的培養系統，其特征在于，所述CHIR-99021的濃度為1-10μM。
17.根據權利要求16所述的培養系統，其特征在于，所述CHIR-99021的濃度為2.5μM。
18.一種培養系統，其特征在于，所述培養系統包括：基質膠、Advanced DMEM/F12、N2、B27、雙抗、2mM 的GlutaMAX、1mM的N-acetylcysteine、500ng/mL的R-spondin 1、10μM 的Blebbistatin、0.5 μM的LDN-193189、2.5μM CHIR-99021；其中，所述基質膠的厚度均一為10μm。
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