[發明專利]一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA的方法

有效

• 申請號: 201810386068.6
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108251416B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 陸超平;馬源潮
• 申請（專利權）人: 海南歸耘田農業科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京中建聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11004
• 代理人: 劉湘舟

本發明公開了一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA的方法，本發明的具體操作步驟為：1.獲取樣本：從克氏原螯蝦身上獲取粘液200ul；2.處理樣本：把粘液放入低溫離心機離心一分鐘，除去上清液；3.裂解細胞：把裂解液和蛋白酶K放入粘液里水浴裂解細胞；4.沉淀蛋白質：把飽和酚和氯仿放入粘液沉淀蛋白質；5.沉淀DNA：加入異丙醇沉淀DNA；6獲取DNA：向DNA加水獲取DNA。本發明方法可以快速有效的獲取克氏原螯蝦DNA，本發明提取的DNA質量高，不受蛋白質的污染，可用于分子生物學實驗。本發明提取克氏原螯蝦DNA不會對克氏原螯蝦造成任何傷害，從而為克氏原螯蝦的種質資源保護和進行遺傳多樣性研究提供了一項技術手段，具有重大的科學意義和實用價值。

技術領域

本發明涉及一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA?的方法，屬于生物工程領域。

背景技術

克氏原螯蝦型似蝦而外殼堅硬。體長約5.6-11.9厘米，暗紅色，甲殼上部分為黑色，是淡水經濟蝦類。因肉味鮮美受到廣大人們的喜愛。因其雜食性、生長迅速、適應能力強等原因在外界環境中具有絕對的競爭優勢。其攝食范圍包括水草、藻類、水生昆蟲、動物尸體等。

然而，進行克氏原螯蝦的遺傳多樣性研究和保護需要大量的克氏原螯蝦樣本進行生物分析，進行生物分析的基礎往往是提取DNA和RNA進行研究。傳統的提取克氏原螯蝦DNA的方法是從肌肉內提取，這些提取DNA的方法會對克氏原螯蝦造成很嚴重的損傷，影響克氏原螯蝦的生長，甚至會對幼小的克氏原螯蝦造成死亡，由此可見，開展一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA的方法勢在必行。

無損傷提取DNA是指在不傷害動物本身的情況下，通過收集脫落的毛發、皮膚、羽毛、糞便、尿液、脫落的魚鱗等從中提取DNA的過程。目前關于魚類無損傷提取DNA的報道僅有幾篇，關于克氏原螯蝦無損傷提取DNA的方法尚未報道。

發明內容

本發明的目的是提供了一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA的方法。

技術方案

1.一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA?的方法包括如下步驟：

（1）獲取樣本：取克氏原螯蝦剛脫掉的外殼100mg，放入4℃下，防止DNA降解；

（2）樣本的處理：把外殼放入研缽進行研碎成粉末狀，研磨時加入少量液氮，保持外殼一直處于低溫狀態；

（3）裂解細胞：把研磨好的外殼粉末加入0.5ml裂解液和0.03ml蛋白酶K，然后56℃水浴1個小時，裂解細胞，每隔10分鐘搖晃一次樣品；

（4）沉淀蛋白質：把裂解細胞的結果放在低溫離心機4℃離心10分鐘，轉速為5000轉/分，把上清液轉移到新的離心管內，加入0.5ml飽和酚和0.3ml氯仿，?劇烈搖晃10秒，然后4℃放置10分鐘，沉淀蛋白質；

（5）沉淀DNA：把沉淀蛋白質的結果放在低溫離心機4℃離心10分鐘，轉速為10000轉/分，把上清液轉移到新的離心管內，加入零下20℃預冷的1ml異丙醇，劇烈搖晃10秒，4℃放置10分鐘，沉淀DNA；

（6）洗滌DNA：把沉淀DNA的結果放在低溫離心機4℃離心10分鐘，轉速為10000轉/分，把上清液倒掉，留下白色沉淀，加入1ml70%的乙醇洗滌DNA，劇烈搖晃10秒，4℃放置1分鐘，洗滌DNA；

（7）獲取DNA：向洗滌后的DNA加0.3ml水獲取DNA。

2.上述的獲取樣本時，其特征在于：從克氏原螯蝦獲取外殼時，要剛脫掉的外殼，脫殼時間不能超過半小時，取到外殼后放置在4℃環境中，放置DNA降解。

與現有技術相比，本發明具有以下的優點：

1．本發明建立了一套完整的提取克氏原螯蝦DNA的方法。

2．本發明提供的提取克氏原螯蝦DNA方法不會對克氏原螯蝦造成任何損傷。