[發(fā)明專利]一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810386068.6 | 申請日： | 2018-04-26 |
| 公開（公告）號： | CN108251416B | 公開（公告）日： | 2023-09-15 |
| 發(fā)明（設計）人： | 陸超平;馬源潮 | 申請（專利權）人： | 海南歸耘田農(nóng)業(yè)科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京中建聯(lián)合知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11004 | 代理人： | 劉湘舟 |
| 地址： | 572000 海南省海口市*** | 國省代碼： | 海南;46 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 損傷 提取 克氏原螯蝦 dna 方法 | ||
1.一種無損傷提取克氏原螯蝦DNA?的方法，包括如下步驟：
（1）獲取樣本：取克氏原螯蝦剛脫掉的外殼100mg，放入4℃下，防止DNA降解；
（2）樣本的處理：把外殼放入研缽進行研碎成粉末狀，研磨時加入少量液氮，保持外殼一直處于低溫狀態(tài)；
（3）裂解細胞：把研磨好的外殼粉末加入0.5ml裂解液和0.03ml蛋白酶K，然后56℃水浴1個小時，裂解細胞，每隔10分鐘搖晃一次樣品；
（4）沉淀蛋白質(zhì)：把裂解細胞的結果放在低溫離心機4℃離心10分鐘，轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分，把上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管內(nèi)，加入0.5ml飽和酚和0.3ml氯仿，?劇烈搖晃10秒，然后4℃放置10分鐘，沉淀蛋白質(zhì)；
（5）沉淀DNA：把沉淀蛋白質(zhì)的結果放在低溫離心機4℃離心10分鐘，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分，把上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管內(nèi)，加入零下20℃預冷的1ml異丙醇，劇烈搖晃10秒，4℃放置10分鐘，沉淀DNA；
（6）洗滌DNA：把沉淀DNA的結果放在低溫離心機4℃離心10分鐘，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分，把上清液倒掉，留下白色沉淀，加入1ml70%的乙醇洗滌DNA，劇烈搖晃10秒，4℃放置1分鐘，洗滌DNA；
（7）獲取DNA：向洗滌后的DNA加0.3ml水；其中，從克氏原螯蝦獲取外殼時，要剛脫掉的外殼，脫殼時間不能超過半小時，取到外殼后放置在4℃環(huán)境中，防止DNA降解。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于海南歸耘田農(nóng)業(yè)科技有限公司，未經(jīng)海南歸耘田農(nóng)業(yè)科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權和技術合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810386068.6/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
