[發(fā)明專利]抗繆勒氏管激素光激發(fā)化學發(fā)光檢測試劑盒制備方法及其試劑盒和使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810380941.0
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108982879A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 李亨芬;施曉燕;柳飛舟
• 申請（專利權(quán)）人: 上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 上海天翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

本發(fā)明公開的抗繆勒氏管激素光激發(fā)化學發(fā)光檢測試劑盒制備方法，包含如下步驟：(1)發(fā)光試劑緩沖液的配制步驟；(2)抗AMH抗體偶聯(lián)發(fā)光微粒制備步驟；(3)生物素標記抗AMH抗體制備步驟；(4)親和素標記感光微粒制備步驟；(5)AMH校準品的制備步驟。本發(fā)明還公開了由該抗繆勒氏管激素光激發(fā)化學發(fā)光檢測試劑盒制備方法制備的抗繆勒氏管激素光激發(fā)化學發(fā)光檢測試劑盒以及該抗繆勒氏管激素光激發(fā)化學發(fā)光檢測試劑盒的使用方法。本發(fā)明利用光激發(fā)化學發(fā)光的方式，即利用感光微粒和發(fā)光微粒之間的單線態(tài)氧傳遞作用來發(fā)光，實現(xiàn)兩種微粒的結(jié)合及發(fā)光，使檢測特異性提高；發(fā)光材料包裹在發(fā)光微粒的顆粒中，不容易受環(huán)境干擾，有更高的特異性和穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血清(血漿)中抗繆勒氏管激素(AMH)的光激發(fā)化學發(fā)光檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗繆勒氏管激素光激發(fā)化學發(fā)光檢測試劑盒制備方法及其試劑盒和使用方法。

背景技術(shù)

抗繆勒氏管激素(anti-Mullerian hormone，AMH)，又稱繆勒管抑制物(Mullerianinhibiting substance，MIS)，屬于轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族，AMH是由二硫鍵連接的糖蛋白二聚體，相對分子質(zhì)量為140 000，其編碼基因位于19號染色體的短臂上，即p13.2～p13.3，具有5個外顯子。

AMH是由睪丸未成熟的Sertoli細胞及卵巢竇前卵泡和小竇卵泡的顆粒細胞分泌。AMH是卵泡生長發(fā)育的調(diào)節(jié)因子，AMH參與生理性卵泡形成過程中的兩次重要募集；始基卵泡募集和優(yōu)勢卵泡募集。AMH通過旁分泌抑制卵泡從始基卵泡池進入生長卵泡池，從而調(diào)控始基卵泡的募集。AMH在始基卵泡向生長卵泡的轉(zhuǎn)換期和早竇卵泡期通過AMH受體直接或間接影響卵泡的發(fā)育過程，可抑制卵泡的生長，放置卵泡過快過早消耗，保存卵巢的儲備功能。過高的AMH對卵泡的生長和發(fā)育有抑制作用，缺乏AMH的卵泡對FSH更敏感。AMH水平在PCOS患者呈2-3倍增加，而其2-5mm卵泡的數(shù)目也增加2-3倍。隨著卵泡逐漸增大，AMH生成逐漸減少至消失，＞9mm的卵泡幾乎無AMH表達。AMH隨年齡增加而下降，至絕經(jīng)前和絕經(jīng)期檢測不出，是預測卵巢儲備的標志物。

竇卵泡數(shù)目(AFC)代表卵巢中卵泡的數(shù)量，年齡代表其中卵子的質(zhì)量，AMH對于數(shù)量和質(zhì)量都有體現(xiàn)，反應了卵泡池中在外源性FSH刺激下可生長卵泡的規(guī)模。在卵巢儲備下降的一系列事件中，AMH的改變相對而言是最早的。對于有正常排卵月經(jīng)的女性而言，AMH比FSH、AFC和INHB更能準確反映卵巢生殖功能的下降和預測即將到來的絕經(jīng)過渡期。

基礎AMH＜1.26μg/L用于預測卵巢儲備能力降低的敏感性可達97％，高度提示卵巢儲備降低，但需用AFC進一步證實。接受IVF/ICSI治療的患者血清及卵泡液中AMH水平越高則受精率越高。因此，AMH可能成為預測受精率的指標。AMH預測妊娠結(jié)局的作用明顯優(yōu)于FSH。預測卵巢低反應時AMH與AFC的作用無顯著差別。預測OHSS優(yōu)于年齡和BMI。發(fā)生OHSS患者的基礎AMH較正常人高6倍，提示AMH可能提前預測OHSS。AMH水平不受垂體Gn的影響，在整個月經(jīng)周期中數(shù)值變化不大，保持較恒定的水平，故AMH是唯一既能在卵泡期又能在黃體期進行測定的卵巢儲備標志物。

血清AMH與早卵泡期FSH、INHB和E2相比，AMH可更早期，更準確地預測婦女卵巢儲備的變化，在檢測卵巢儲備力、預測IVF成功率及預防OHSS并發(fā)癥等方面具有其他指標不可比擬的優(yōu)勢，從而在指導臨床診斷和治療中起重要作用，因此AMH在輔助生殖領(lǐng)域的應用有較大的發(fā)展空間。