[發明專利]抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法及其試劑盒和使用方法

在審

• 申請號: 201810380941.0
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108982879A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 李亨芬;施曉燕;柳飛舟
• 申請（專利權）人: 上海銘源數康生物芯片有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

1.抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，包含如下步驟：

(1)發光試劑緩沖液的配制步驟；

(2)抗AMH抗體偶聯發光微粒制備步驟；

(3)生物素標記抗AMH抗體制備步驟；

(4)親和素標記感光微粒制備步驟；

(5)AMH校準品的制備步驟。

2.如權利要求1所述的抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述發光試劑緩沖液的配置步驟由以下步驟組成：

①稱取HEPES 6g于1L的容器中，加入適量的純化水攪拌，

②用移液器移取5mL的Triton X-100于100mL純化水的燒杯中，完全溶解后倒入上述1L容器中，加入純化水至900mL并充分攪拌；

③調節pH計測量溶液pH，加入HCl或NaOH調節pH，使其控制在7.2-7.4；

④稱取酪蛋白1g加入上述1L容器中，攪拌均勻，使其充分溶解；

⑤稱取1g Dextran 500加入上述1L容器中，攪拌均勻，使其充分溶解，

⑥定容至1L，用0.2μm濾器過濾，過濾后貼好標簽于2-8℃無菌環境下貯存。

3.如權利要求1所述的抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述抗AMH抗體偶聯發光微粒制備步驟由以下步驟組成：

①發光微粒的準備：吸取一定量的發光微粒于高速冷凍離心機中離心，棄去上清，用一定量0.05M pH6.0MES緩沖液，超聲破碎至發光微粒重新懸浮，加入0.05M pH6.0MES緩沖液調節發光微粒濃度為100mg/mL；

②抗體的準備：將100μg抗AMH單克隆抗體加入到超濾管中，10000g冷凍離心10分鐘，用0.05M pH6.0的MES緩沖液重復洗滌5次后，將AMH抗體濃度調節至8mg/mL；

③將上述準備好的100mg/mL的發光微粒混懸液與8mg/mL的抗AMH抗體以10-50:1的質量比混合，迅速渦旋混勻，得到反應液；

④用0.05M pH6.0的MES緩沖液配制25mg/mL的NaBH₃CN溶液，再按照與反應液1:25的體積比加入，迅速渦旋混勻，37℃避光旋轉反應48小時；

⑤用0.05M pH6.0MES緩沖液配制75mg/mL的甘氨酸溶液以及25mg/mL的NaBH₃CN溶液，按照與反應液2:1:10的體積比加入上述溶液中，迅速渦旋混勻，37℃旋轉反應2小時，再加入200mg/mL的BSA溶液(0.05M pH6.0MES緩沖液溶解)，其與反應液體積比為5:8，迅速渦旋混勻，37℃避光旋轉反應16小時；

⑥用0.05M pH6.0MES緩沖液離心清洗三次，最后用試劑盒發光試劑緩沖液進行重懸保存。

4.如權利要求3所述的抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述發光微粒是指填充有發光化合物和鑭系元素化合物的高分子微粒。

5.如權利要求4所述的抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述發光化合物為二氧雜環己烯(Dioxene)或二甲基噻吩(thioxene)的衍生物。

6.如權利要求4所述的抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述鑭系元素化合物為Eu(TTA)₃/TOPO或Eu(TTA)₃/Phen。

7.如權利要求4所述的抗繆勒氏管激素光激發化學發光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述發光微粒具有表面官能團，所述表面官能團為任何能聯結蛋白質的基團。