[發(fā)明專利]一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法及其體內(nèi)應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810380388.0
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108524953A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉敬民;王碩
• 申請（專利權(quán)）人: 南開大學(xué)
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;C09K11/66
• 代理公司: 天津合正知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229
• 代理人: 陳松

1.一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a)通過溶劑熱-高溫煅燒法，制備具備近紅外熒光和超長余輝性質(zhì)的Cr³⁺摻雜的鎵鍺酸鋅長余輝熒光納米探針；

(b)通過抗體表面功能化，實現(xiàn)對于目標(biāo)益生菌的特異性熒光標(biāo)記。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(a)制備Cr³⁺摻雜的鎵鍺酸鋅長余輝納米探針的過程如下：

(1)將金屬離子溶液按照一定比例混合并調(diào)節(jié)pH使其發(fā)生共沉淀反應(yīng)從而得到反應(yīng)液；

(2)將步驟(1)所制備的反應(yīng)液在聚四氟乙烯反應(yīng)釜中進行溶劑熱反應(yīng)；

(3)將步驟(2)中產(chǎn)物離心洗滌并使用瑪瑙研缽粗研后在馬弗爐中煅燒；

(4)將步驟(3)所制得的固體粉末研磨并離心篩選得到粒徑均一的長余輝納米探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(1)各金屬元素比例按照納米材料的化學(xué)結(jié)構(gòu)式配制Zn_1.25Ga_1.5Ge_0.25O₄:0.5％Cr³⁺，溶劑為2mL油酸和15mL甲苯，pH調(diào)節(jié)使用叔丁胺，最終pH為7.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(2)在聚四氟乙烯反應(yīng)釜中溶劑熱反應(yīng)溫度為120℃，反應(yīng)時間為24小時。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(3)在馬弗爐中煅燒溫度為750℃，反應(yīng)時間為5小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(b)通過抗體表面功能化標(biāo)記益生菌的過程如下：

(1)將步驟(a)得到的Cr³⁺摻雜的鎵鍺酸鋅長余輝熒光納米探針分散到2mL N,N-二甲基甲酰胺中，磁力攪拌30分鐘；

(2)將3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到步驟(1)的溶液里，磁力攪拌8小時；

(3)將步驟(2)得到溶液離心去除未反應(yīng)的3-氨丙基三乙氧基硅烷，然后加入抗體和催化劑，室溫避光振搖30分鐘，離心洗滌；

(4)將步驟(3)得到溶液與目標(biāo)益生菌液混合，孵育。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(2)中3-氨丙基三乙氧基硅烷使用量為20μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(3)中所使用的抗體為革蘭氏陽性菌LTA抗體，將1mg抗體溶解于10mL PBS進行修飾，修飾方法為EDC-NHS催化羧基-氨基反應(yīng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法，其特征在于，所述步驟(4)中孵育條件為37℃下輕搖孵育1小時。

10.一種食源性益生菌的特異性熒光標(biāo)記方法的體內(nèi)應(yīng)用，其特征在于，通過口服進入生物體內(nèi)，借助長余輝納米探針體外激發(fā)的光學(xué)生物成像技術(shù)，實時監(jiān)控益生菌在體內(nèi)的代謝分布過程。