[發(fā)明專利]一種煙草根黑腐病菌的分離方法

在審

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• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108384725A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 康業(yè)斌;李淑君;趙世民;康蕾;葉紅朝;周俊學(xué);董昆樂;孔德輝;王玉潔;馬君紅;李成軍;王海濤;陳玉國;白靜科;丘睿
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué);河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所;河南省煙草公司洛陽市公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 洛陽公信知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 孫笑飛

1.一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：采集具有煙草根黑腐病癥狀的煙草植株的根際土壤，將采集的根際土壤干燥磨碎后粘附于胡蘿卜片上，然后將粘附有土壤的胡蘿卜片放置在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)2—4天，之后用加有50 μL/mL青霉素和50 μL/mL硫酸鏈霉素的無菌水沖洗胡蘿卜片，繼續(xù)培養(yǎng)2—4天后，挑取胡蘿卜片上具有煙草根黑腐病典型病癥的霉層，純化培養(yǎng)后保存。

2.如權(quán)利要求1所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：所述的根際土壤為距煙草根系表面2 mm以內(nèi)的土壤。

3.如權(quán)利要求1所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：所述的胡蘿卜片的厚度為4-6 mm。

4.如權(quán)利要求1或3所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：所述的胡蘿卜片為新鮮胡蘿卜用濃度75%酒精進行表面消毒后，使用滅菌刀切成的圓片。

5.如權(quán)利要求1所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：先在培養(yǎng)皿中鋪設(shè)浸過蒸餾水的脫脂棉及濾紙，然后再將粘附有土壤的胡蘿卜片放于其中培養(yǎng)。

6.如權(quán)利要求1或5所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：胡蘿卜片在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的過程中，保持其處于潮濕狀態(tài)。

7.如權(quán)利要求1或5所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：胡蘿卜片在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的過程中，保持培養(yǎng)溫度為25 ℃。

8.如權(quán)利要求1所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：挑取胡蘿卜片上具有煙草根黑腐病典型病癥的霉層后，轉(zhuǎn)接至PDA平板上，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱，黑暗條件下純化培養(yǎng)3-5d后，進行純化培養(yǎng)2-3次。

9.如權(quán)利要求1或8所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：純化培養(yǎng)后，挑取邊緣菌落轉(zhuǎn)至PDA斜面培養(yǎng)基上，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，黑暗條件下培養(yǎng)5-7d后，進行菌株保存。

10.如權(quán)利要求9所述的一種煙草根黑腐病菌的分離方法，其特征在于：所述的PDA平板及PDA斜面培養(yǎng)基中，每100ml的PDA培養(yǎng)基中含馬鈴薯20g，葡萄糖2g，瓊脂2g，pH值為7.0，余量為水。