[發(fā)明專利]用于結(jié)直腸癌相關(guān)基因甲基化的檢測方法、試劑盒及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810379698.0
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108642178A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙杰;李艷紅;單嘉杰
• 申請（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 黃瑩

1.用于檢測LAD1基因甲基化的特異性引物對，其特征在于：

由上游引物和下游引物組成，

所述的上游引物為：GATTATCGGGTGTCGTAGTTC，

所述的下游引物為：CCCTAACGCAACGTACGCG。

2.與權(quán)利要求1所述的特異性引物對配合使用的熒光探針，其特征在于，包括以下任意序列：

(1)TGAGTAGAATAAGGAGAGATTAT，

(2)ACAACTAACACTTAACATTATAAC。

3.權(quán)利要求1所述的特異性引物對和/或權(quán)利要求2所述的熒光探針在制備檢測LAD1基因甲基化的試劑盒中的應(yīng)用。

4.一種用于檢測LAD1基因甲基化的生物標(biāo)志物，其特征在于：

其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

5.一種檢測LAD1基因甲基化的試劑盒，其特征在于：

包含權(quán)利要求1所述的特異性引物對。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測LAD1基因甲基化的試劑盒，其特征在于，還可以包括如下用于進一步確認非甲基化結(jié)果的引物對：

LAD1-uF：AGATTATTGGGTGTTGTAGTTT，

LAD1-uR：AACCCTAACACAACATACACA。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的檢測LAD1基因甲基化的試劑盒，其特征在于：

還包含如權(quán)利要求2所述的熒光探針或熒光染料。

8.一種LAD1基因甲基化檢測方法，其特征在于：

利用如SEQ ID NO.1～2所示的特異性引物對和如SEQ ID NO.5～6所示的熒光探針或熒光染料進行實時定量PCR，檢測待測樣本中的LAD1基因甲基化程度。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的LAD1基因甲基化檢測方法，其特征在于：

還包括利用如SEQ ID NO.3～4所示的引物對進行實時定量PCR的步驟。

10.權(quán)利要求1～3所述的特異性引物對和/或熒光探針、權(quán)利要求5～7所述的檢測LAD1基因甲基化的試劑盒、權(quán)利要求8或9所述的LAD1基因甲基化檢測方法在結(jié)直腸癌檢測中的應(yīng)用。