[發(fā)明專利]用于篩選檢定黃曲霉毒素B1降解菌的培養(yǎng)基及篩選檢定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810378524.2
• 申請(qǐng)日: 2018-04-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108588170A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張智猛;王明清;孫杰;張初署;戴良香
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省花生研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04
• 代理公司: 青島發(fā)思特專利商標(biāo)代理有限公司 37212
• 代理人: 鞏同海

本發(fā)明屬于微生物菌株篩選技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于篩選檢定黃曲霉毒素B1降解菌的培養(yǎng)基及篩選檢定方法。篩選檢定方法，包括培養(yǎng)和鑒定兩個(gè)步驟，培養(yǎng)以香豆素為唯一碳源，經(jīng)初選和純化后得到初篩菌株，然后加入AFB₁標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)AFB₁進(jìn)行降解；鑒定采用HPLC進(jìn)行測(cè)定，對(duì)土壤中是否含有用于降解黃曲霉毒素B1的菌株進(jìn)行檢定；該方法以香豆素為唯一碳源，對(duì)原料無(wú)污染、具有高度專一性；能夠高效、簡(jiǎn)易、準(zhǔn)確的確定土壤中是否含有用于降解黃曲霉毒素B1的菌株，降低篩選成本；同時(shí)，篩選出的菌株能夠有效去除黃曲霉毒素，且避免毒素重新產(chǎn)生，是一種高效、安全的去毒方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物菌株篩選技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于篩選檢定黃曲霉毒素B1降解菌的培養(yǎng)基及篩選檢定方法。

背景技術(shù)

黃曲霉毒素是一類主要由黃曲霉、寄生曲霉、集蜂曲霉、溜曲霉等真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝物，該類毒素是由二呋喃環(huán)和香豆素組成的結(jié)構(gòu)類似物，具有強(qiáng)肝毒性、致突變性、致癌性和致畸性。黃曲霉毒素污染的范圍較泛，如花生、玉米、干果、牛奶等食品，因其毒性強(qiáng)，越來(lái)越受到關(guān)注。我國(guó)是花生出口貿(mào)易大國(guó)，黃曲霉毒素超標(biāo)是影響我國(guó)花生出口的主要問(wèn)題。現(xiàn)在已鑒定出二十多種黃曲霉毒素，其中黃曲霉毒素B₁(AFB₁)分布范圍最廣，并且毒性最強(qiáng)。目前世界上約有一百多個(gè)國(guó)家對(duì)食品中黃曲霉毒素提出了限量要求，我國(guó)規(guī)定花生和玉米中AFB₁的最大限量為20μg/kg，歐盟所有成員國(guó)嚴(yán)格規(guī)定花生等食品中AFB₁的含量低于2μg/kg，黃曲霉毒素總量小于4μg/kg。因此，尋找能有效脫除花生等農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素的方法對(duì)保障食品安全具有重要的意義。

國(guó)內(nèi)外去除AFB₁的方法主要有輻照、熱處理、吸附劑脫毒等物理法，及強(qiáng)堿、強(qiáng)酸、氧化劑處理等化學(xué)法，但這些理化方法不僅成本高、效率低，且部分方法還伴有毒性物質(zhì)產(chǎn)生。微生物脫毒法成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)，該方法主要利用細(xì)菌、真菌等微生物及其代謝產(chǎn)物去除食品中污染的AFB₁，該脫毒法對(duì)原料無(wú)污染、具有高度專一性、同時(shí)避免毒素重新產(chǎn)生，因此是一種高效、安全的去毒方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題之一是，提供一種用于篩選檢定黃曲霉毒素B1降解菌的培養(yǎng)基。

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題之二是，提供一種用于降解黃曲霉毒素B1的菌株的篩選檢定方法，從而高效、簡(jiǎn)易、準(zhǔn)確的確定土壤中是否含有用于降解黃曲霉毒素B1的菌株，降低篩選成本。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種用于篩選檢定黃曲霉毒素B1降解菌的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基為香豆素液體培養(yǎng)基和/或香豆素固體培養(yǎng)基，香豆素液體培養(yǎng)基的成分為：KH₂PO₄ 0.25g/L、MgSO₄·7H₂O0.25g/L、KNO₃ 0.5g/L、(NH₄)₂SO₄ 0.5g/L、CaCl₂ 0.005g/L、FeCl₃·6H₂O 0.003g/L、pH7.0；121℃高壓滅菌20min后加入已消毒殺菌的香豆素溶液至1g/L；香豆素固體培養(yǎng)基的成分為：在香豆素液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入20g/L瓊脂。

一種用于降解黃曲霉毒素B1的菌株的篩選檢定方法，包括培養(yǎng)和鑒定兩個(gè)步驟，培養(yǎng)以香豆素為唯一碳源，經(jīng)初選和純化后得到初篩菌株，然后加入AFB₁標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)AFB₁進(jìn)行降解；鑒定采用HPLC進(jìn)行測(cè)定，對(duì)土壤中是否含有用于降解黃曲霉毒素B1的菌株進(jìn)行檢定；

所述初篩菌株的培養(yǎng)過(guò)程包括：

步驟一：采集花生主產(chǎn)區(qū)的土壤樣品保存?zhèn)溆茫?/p>