[發明專利]一種乙型肝炎病毒核酸提取試劑及其提取方法

在審

• 申請號: 201810374086.2
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108570466A
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: 張炳強
• 申請（專利權）人: 青島瑞思科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種乙型肝炎病毒核酸提取試劑及其提取方法。所述提取試劑包含以下重量份的原料：試劑A 20?40份、試劑B 15?30份、試劑C 15?30份、試劑D 50?80份和磁性納米顆粒；試劑A包括以下原料：Tris、EDTA、NP?40、氯化鈉、3?羥基丙磺酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、異硫氰酸胍、β?巰基乙醇，水；試劑B包括以下原料：鹽酸胍、水飽和酚、硫酸銨、木糖醇、吡咯烷酮、異丁醇；試劑C包括以下原料：二甲基甲酰胺和丙醇二酸；試劑D為無水乙醇；磁性納米顆粒為納米氧化鐵。本發明能在不使用蛋白酶K及carrierRNA的情況下進行常溫提取低濃度游離核酸，具有操作簡便、提高提取效率和提取純度的優點。

技術領域

本發明涉及基因技術領域，具體是一種乙型肝炎病毒核酸提取試劑及其提取方法。

背景技術

在臨床乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)核酸定量檢測中，HBVDNA提取是首先進行的第一步操作。目前核酸提取方法主要有酚氯仿抽提、離心柱法和磁珠法。酚氯仿抽提因大量使用有毒溶劑，對操作者毒性較大，且難于實現自動化操作。離心柱法因其游離核酸提取效率低、成本高，且需要高速離心機，也難于實現自動化，均不能廣泛適用于大規模的臨床檢測。近年發展起來的磁珠法提取核酸技術，其采用超順磁性納米顆粒，利用在高鹽低pH下吸附核酸，然后在低鹽高pH下分離核酸的原理進行樣本核酸的分離純化，因其只需要在磁場作用下就能將核酸分離純化出來，故其能實現高通量自動化標準化操作。而目前市場上的基于磁珠法的商品化試劑操作過于復雜，并且需要一定溫度下使用蛋白酶K及carrierRNA進行孵育，同時需要多步洗滌等步驟，導致提取效率低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種乙型肝炎病毒核酸提取試劑及其提取方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種乙型肝炎病毒核酸提取試劑，所述提取試劑包含以下重量份的原料：試劑A20-40份、試劑B 15-30份、試劑C 15-30份、試劑D 50-80份和磁性納米顆粒；試劑A包括以下重量份的原料：Tris7-16份、EDTA5-10份、NP-40 5-8份、氯化鈉1-3份、3-羥基丙磺酸6-11份、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉2-5份、異硫氰酸胍6-11份、β-巰基乙醇5-8份，水15-25份；試劑B包括以下重量份的原料：鹽酸胍5-11份、水飽和酚3-5份、硫酸銨5-7份、木糖醇1-3份、吡咯烷酮2-5份、異丁醇1-5份；試劑C包括以下重量份的原料：二甲基甲酰胺8-15份和丙醇二酸6-13份；試劑D為無水乙醇；磁性納米顆粒為納米氧化鐵。

作為本發明進一步的方案：所述提取試劑包含以下重量份的原料：試劑A 35份、試劑B 22份、試劑C 24份和試劑D 72份。

作為本發明進一步的方案：試劑A包括以下重量份的原料：Tris 12份、EDTA 8份、NP-40 7份、氯化鈉2份、3-羥基丙磺酸8份、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉4份、異硫氰酸胍10份、β-巰基乙醇6份，水20份。

作為本發明進一步的方案：試劑B包括以下重量份的原料：鹽酸胍9份、水飽和酚4份、硫酸銨6份、木糖醇2份、吡咯烷酮4份、異丁醇3份。

作為本發明進一步的方案：試劑C包括以下重量份的原料：二甲基甲酰胺12份和丙醇二酸11份。

一種乙型肝炎病毒核酸提取試劑的提取方法，包括以下步驟：(1)將試劑A、試劑B、試劑C和試劑D混合均勻，得到混合液，備用；(2)于100ul樣本中加入200ul上述混合液，然后再加入25ul磁性納米顆粒，混合后進行第一次磁分離處理，棄去第一次磁分離處理后的上清液，然后進行第二次磁分離處理，棄去第二次磁分離處理后的上清液，然后進行第三次磁分離處理，取第三次磁分離處理后的上清液，即得乙型肝炎病毒核酸。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：