[發明專利]基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201810369721.8
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108441542A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 鐘華敏;胡思琪;關小珊;鄧秋連;鐘玉葵;謝永強;周珍文
• 申請（專利權）人: 廣州市婦女兒童醫療中心
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/14
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開了一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒及方法。本發明提供的該試劑盒包括如SEQ ID NO.1～3所示的引物和探針。本發明提供的方法能在40分鐘內完成標本中GBS的檢測，檢測快速準確；操作步驟較少，整個過程無需特殊的儀器設備，且結果直接肉眼觀察，實驗操作簡捷。

技術領域

本發明涉及一種無乳鏈球菌的檢測試劑盒，特別涉及一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒及方法。

背景技術

無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae，group B streptococcus，GBS)屬于鏈球菌屬B血清群，為一種常見的有莢膜的革蘭氏陽性致病菌。GBS是圍生期女性泌尿生殖道感染和新生兒感染的常見病原菌，具有發病率高和病死率高的特點。GBS寄生在母體生殖道，分娩時可導致新生兒攜帶該菌，是引發以產褥期膿毒癥、肺炎和腦膜炎為特征的新生兒感染的重要致病菌之一；同時，孕婦GBS感染易發生胎膜早破、絨毛羊膜炎、子宮內膜炎和尿道感染等疾病。20世紀70年代以來，GBS所致的婦女生殖道感染，尤其是在圍產期感染呈上升趨勢。90年代以來，在發達國家GBS感染是新生兒間接死因的第一位，而發展中國家感染正在上升。

對GBS的診斷主要是通過對孕產婦直腸或陰道拭子、新生兒的血液或腦脊液進行細菌培養來實現，但在檢測孕婦GBS發現此菌普通培養對營養要求較高，培養鑒定耗時較長(至少2d)且陽性率較低。近年來，國內外已有運用血清學檢測方法檢測血清中的GBS特異性抗原及對GBS感染菌株進行血清型分型，方法有乳膠凝集實驗(LA)，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，協同凝集試驗(CoA)及對流免疫電泳(CIE)等。這些方法的特異性約為95％左右，但敏感性從19％到82％不等。即使選用不同試劑盒，這種方法在孕婦定植中檢出率僅為4％-37％。1997年，美國食品和藥品管理局(FDA)發出這類方法假陰性率和假陽性率均很高的可信度警告。另外，血清學方法包括酶免疫分析，CIE以及抑制性酶聯免疫分析等也可對GBS分型，但均需要高滴度的抗血清或昂貴的試劑盒，限制了應用。

由于傳統的培養和血清學檢測方法存在檢測耗時長、檢測靈敏度和陽性率低及檢測成本昂貴等問題，再加上GBS的抗生素預防策略的實施以及抗生素的廣泛應用，對輕度感染和經抗生素治療的患者，傳統的培養和血清學檢測方法出現很高的假陰性率和假陽性率發生。

PCR技術的發展，為檢測各種臨床標本中的病原菌提供了快速、敏感、特異的有力的工具，近年來在檢測GBS感染方面也得到了廣泛的應用。但是，人們仍在在研究更為快速、更為靈敏、更為簡便、不依賴于精密儀器的檢測方法。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒。

本發明的另一目的在于提供一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，包括引物GBS-F-1、引物GBS-R-1和探針GBS-P-1；

引物GBS-F-1：5’-CTCTAGTAAAGCGTGTATTCCAGATTTCCTTATC-3’；

引物GBS-R-1：5’-BIOTIN-CTATTGGTAGTCGTGTAGAAGCCTTAACAGATG-3’；

探針GBS-P-1：5’-FAM-CAACTGAAGCAAATGGATCTAAAATGCGAAT/IDSP(DSPACER)/ACCAGCTTAGTTATCCC-C3 SPACER-3’。

所述的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒還包括用于RPA擴增的nfo試劑、用于RPA擴增的水、試紙條和試紙條檢測緩沖液中的至少一種。