[發明專利]基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201810369721.8
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108441542A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 鐘華敏;胡思琪;關小珊;鄧秋連;鐘玉葵;謝永強;周珍文
• 申請（專利權）人: 廣州市婦女兒童醫療中心
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/14
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：包括如SEQ ID NO.1所示的引物GBS-F-1、如SEQ ID NO.2所示的引物GBS-R-1和如SEQID NO.3所示的探針GBS-P-1。

2.根據權利要求1所述的基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：還包括用于RPA擴增的nfo試劑、用于RPA擴增的水、試紙條和試紙條檢測緩沖液中的至少一種。

3.根據權利要求2所述的基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述的用于RPA擴增的nfo試劑包括nfo干粉試劑、用于RPA擴增的緩沖液和乙酸鎂中的至少一種。

4.根據權利要求2所述的基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述的用于RPA擴增的水為雙蒸水或超純水。

5.根據權利要求2所述的基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述的試紙條為測流層析試紙條。

6.根據權利要求1所述的基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒包含預混液，預混液中的成分包含引物GBS-F-1、引物GBS-R-1和探針GBS-P-1。

7.根據權利要求6所述的基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述的預混液中各成分的濃度以最終使用時各成分的終濃度如下計算：引物GBS-F-1 0.42μM，引物GBS-R-1 0.42μM，探針GBS-P-1 0.12μM。

8.一種基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測方法，其特征在于：應用權利要求1～7任一項所述的試劑盒實現，包括如下步驟：

(1)對待檢測樣本提取基因組DNA；

(2)配制RPA擴增反應體系；每50μl反應體系的組成如下：1管nfo干粉試劑、用于RPA擴增的緩沖液29.5μl、濃度為10μM的引物GBS-F-1和GBS-R-1各2.1μl、濃度為10μM的探針GBS-P-1 0.6μl、基因組DNA 2μl，用于RPA擴增的水補足至47.5μl；

(3)加入濃度為280mM的乙酸鎂2.5μl，立即進行RPA擴增，37℃反應25min；

(4)試紙條檢測：取5μl RPA擴增產物，加入100μl試紙條檢測緩沖液，混勻后插入試紙條反應5-15min，最后判讀結果；

(5)結果判讀：

每批次實驗必須同時做陽性對照、陰性對照和空白對照，三種對照完全符合后才能確認結果的可靠性；

①若只是試紙條的Control條帶顯色，檢測結果為陰性；

②若試紙條的Control條帶和檢測條帶同時顯色，檢測結果為陽性。

9.根據權利要求8所述基于重組酶聚合酶擴增技術的無乳鏈球菌可視化核酸檢測方法，其特征在于：步驟(1)中所述的標本包括泌尿生殖道分泌物棉拭子。