[發明專利]采用一測多評法測定姜藥材提取物中姜辣素含量的方法

有效

• 申請號: 201810368262.1
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108709788B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 李智寧;李曉;魏磊;陳玲;王學方;王志堯;宋夢嬌;魏悅;李飛飛;范毅;于立芹;崔煒;寧二娟
• 申請（專利權）人: 河南科高中標檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N1/38
• 分類號: G01N1/38;G01N21/33;G01N30/72
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

1.采用一測多評法測定姜藥材提取物中姜辣素含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備

分別精密稱定N-香草基壬烷酰胺、6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚5種對照品，用甲醇溶解稀釋，制得各單一對照品儲備液，然后量取單一對照品儲備液，用甲醇稀釋混勻，制得混合對照品標準溶液；同時，配制質量濃度分別為C_oL及C_oH的N-香草基壬烷酰胺標準溶液，C_oL小于C_oH；將混合對照品標準溶液及N-香草基壬烷酰胺標準溶液冷凍避光保存；

(2)供試品溶液的制備

直接取姜藥材提取物，加入步驟(1)制得的N-香草基壬烷酰胺對照品儲備液或N-香草基壬烷酰胺標準溶液，混合并用溶劑定容，得到供試品溶液；

或者將姜藥材提取物用50％～100％甲醇稀釋，得到提取物母液，再取提取物母液，加入步驟(1)制得的N-香草基壬烷酰胺對照品儲備液或N-香草基壬烷酰胺標準溶液，混合并用溶劑定容，得到供試品溶液；

供試品溶液中N-香草基壬烷酰胺的含量為0.05～1.00μg/mL；

(3)相對校正因子f_ox和相對保留時間Rt_R的計算

用UPLC-MS-DAD進行測定，進樣系列濃度的步驟(1)制備得到的混合對照品標準溶液，獲得TIC色譜圖和MRM色譜圖并進行峰面積積分，選取N-香草基壬烷酰胺為內參化合物，分別計算混合對照品標準溶液中N-香草基壬烷酰胺對6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚的相對校正因子f_ox和相對保留時間Rt_R；

所述相對校正因子f_ox的計算公式為：

式中：A_o為內參物N-香草基壬烷酰胺對照品的峰面積，C_o為內參物N-香草基壬烷酰胺對照品的質量濃度，A_x為被測組分對照品x的峰面積，C_x為被測組分對照品x的質量濃度；

所述相對保留時間Rt_R的計算公式為：

式中：t_Rx為被測組分對照品x的保留時間，t_Ro為內參物N-香草基壬烷酰胺對照品的保留時間；

(4)供試品中活性成分的測定

取步驟(1)制備得到的N-香草基壬烷酰胺標準溶液及步驟(2)制備得到的供試品溶液進樣，用UPLC-MS-DAD進行測定，獲得TIC色譜圖和MRM色譜圖，按公式計算供試品溶液中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚的質量濃度；

上述的公式為：

式中：C_x’為供試品溶液中被測定組分x的質量濃度，C_xL’為供試品溶液中被測定組分x相對于濃度為C_oL的N-香草基壬烷酰胺標準溶液所計算出的質量濃度，C_xH’為供試品溶液中被測定組分x相對于濃度為C_oH的N-香草基壬烷酰胺標準溶液所計算出的質量濃度，A_x’為供試品溶液中被測組分x的峰面積，A_oL為C_oL濃度N-香草基壬烷酰胺標準溶液的峰面積，A_oH為C_oH濃度N-香草基壬烷酰胺標準溶液的峰面積，f_ox為步驟(3)所得N-香草基壬烷酰胺對被測組分的相對校正因子，N為濃度影響因數；

步驟(3)及步驟(4)所述UPLC測定的條件為：色譜柱為反相C18色譜柱，流動相由流動相A和流動相B組成，以體積濃度為0.02～0.2％甲酸的水溶液或體積濃度0.02～0.2％乙酸的水溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，進行梯度洗脫，流速為0.4～0.6mL/min，檢測波長為280nm±2nm；

所述梯度洗脫的程序為：

。

2.根據權利要求1所述采用一測多評法測定姜藥材提取物中姜辣素含量的方法，其特征在于：步驟(2)中所述溶劑由流動相A和流動相B按照梯度洗脫初始比例混勻而成。