[發明專利]一種金銀忍冬莖尖超低溫保存方法有效
| 申請號： | 201810367569.X | 申請日： | 2018-04-23 |
| 公開（公告）號： | CN108371179B | 公開（公告）日： | 2020-11-13 |
| 發明（設計）人： | 宋紅;田曉璇;李萍;李享 | 申請（專利權）人： | 東北林業大學 |
| 主分類號： | A01N3/00 | 分類號： | A01N3/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 150040 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 金銀 忍冬 超低溫 保存 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種金銀忍冬莖尖超低溫保存方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：
(1)莖尖的剝離和預培養：在無菌條件下，將剝離后的莖尖放入預培養液中處理；所述的莖尖的剝離是指從含莖尖的無菌金銀忍冬莖段上剝取的莖尖長度為2～3mm的含2個葉原基的離體莖尖；預培養液中蔗糖濃度為0.3mol/L的MS溶液，于4℃條件下預培養3d；
(2)裝載：將預培養后的離體莖尖轉接于LS裝載液中，于室溫下裝載40min；所述的裝載液的組成為：2M甘油+0.4mol/L蔗糖+MS的溶液；
(3)PVS2脫水處理：將裝載后的莖尖放入PVS2保護液于0℃條件下脫水處理40min；所述的PVS2保護液的組成為：30％甘油+15％乙二醇+15％二甲基亞砜+0.4mol/L蔗糖+MS的溶液；
(4)液氮保存：將PVS2保護液處理后的莖尖更換新的PVS2保護液，然后迅速將冷凍管投入液氮中，保存24h；
(5)解凍：將液氮保存后的冷凍管取出進行化凍，所述的化凍方式為用40℃水浴中快速解凍70s；
(6)恢復培養：將卸載液洗滌后的莖尖轉至恢復培養基上進行恢復培養；所述的卸載液組分為：1.2mol/L蔗糖+MS的溶液；所述的恢復培養基為MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA31.0mg/L；所述的恢復培養條件為：先在25℃培養箱中暗培養14d，然后轉入正常光下進行培養。
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