[發(fā)明專利]一種屎腸球菌、其高密度發(fā)酵培養(yǎng)方法及由其制備的微生態(tài)制劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810363737.8
• 申請(qǐng)日: 2018-04-22
• 公開（公告）號(hào): CN108641979B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬豐英;蔣貽海;王艷玲;周英俊;崔栩;王宏華;武利利;孫亞磊;劉元元;魏波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島蔚藍(lán)生物股份有限公司;青島動(dòng)保國(guó)家工程技術(shù)研究中心有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/04;A23K10/18;C12R1/01
• 代理公司: 37256 青島清泰聯(lián)信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 李祺;高洋

本發(fā)明提出一種屎腸球菌、其高密度發(fā)酵方法及由其制備的微生態(tài)制劑，屬于乳酸菌培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，篩選出益生性及抗逆性均顯著的屎腸球菌菌株作為飼料添加劑，可有效替代部分抗生素。該技術(shù)方案提供的所述屎腸球菌Enterococcus faecium為E13?5，保藏編號(hào)為CCTCC M2017191。本發(fā)明提供的屎腸球菌可作為安全、高效的新型飼料添加劑來部分替代抗生素使用，從而可滿足現(xiàn)代化的飼料工業(yè)以及畜牧養(yǎng)殖業(yè)的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于乳酸菌培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種屎腸球菌、其高密度發(fā) 酵培養(yǎng)方法及由其制備的微生態(tài)制劑。

背景技術(shù)

屎腸球菌屬于鏈球菌科、腸球菌屬細(xì)菌，革蘭氏陽(yáng)性，兼性厭氧。其具 有優(yōu)良的生物學(xué)特性，是腸道共生菌，可在腸道中形成優(yōu)勢(shì)菌群，由于其生 長(zhǎng)速度快，具較好粘附力，產(chǎn)生乳酸以及一些抗菌物質(zhì)，在許多動(dòng)物新出生 的2-3天內(nèi)占有優(yōu)勢(shì)地位，從而增加有益菌的數(shù)量，抑制有害菌，促進(jìn)腸道 健康，調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)平衡且能防治腹瀉，在提高生長(zhǎng)性能方面有著顯著 的功效，效果與抗生素相當(dāng)。

屎腸球菌不僅具有良好的生物學(xué)特性，還能夠提高動(dòng)物體的免疫能力。 由屎腸球菌組成的益生菌制劑可以提高飼料的轉(zhuǎn)化率，改善畜產(chǎn)品品質(zhì)，降 低腹瀉率以及死亡率。因此，屎腸球菌在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用前景， 其微生態(tài)制劑因具有環(huán)境友好，無殘留等優(yōu)點(diǎn)被越來越多地應(yīng)用于畜牧業(yè)生 產(chǎn)，對(duì)養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境的保護(hù)及養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。

然而，現(xiàn)有屎腸球菌的耐熱性、耐胃酸、耐膽鹽及發(fā)酵性能等不能適應(yīng) 日益發(fā)展的工業(yè)化需求，不能滿足現(xiàn)代化的飼料工業(yè)以及畜牧養(yǎng)殖業(yè)的需求， 因此，篩選出益生性及抗逆性顯著的屎腸球菌菌株成為畜牧業(yè)發(fā)展的一大瓶 頸問題。此外，抗生素的持續(xù)飼喂導(dǎo)致了細(xì)菌的耐藥性、畜產(chǎn)品中的藥物殘 留等日益加重。益生菌作為一種無毒、無殘留、無抗藥性的飼料添加劑，已 成為有效的抗生素替代產(chǎn)品之一。因此，尋找安全、高效的新型飼料添加劑 來部分替代抗生素成為養(yǎng)殖業(yè)亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種屎腸球菌、其高密度發(fā)酵培養(yǎng)方法及由其制備的微生態(tài) 制劑，篩選出益生性及抗逆性均顯著的屎腸球菌菌株作為飼料添加劑，可有 效替代部分抗生素。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一株屎腸球菌，所述屎腸球菌 Enterococcusfaecium為E13-5，保藏編號(hào)為CCTCC M2017191。

本發(fā)明還提供了一種如上述技術(shù)方案所述的屎腸球菌Enterococcus faeciumE13-5的高密度發(fā)酵培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

一級(jí)生產(chǎn)種子培養(yǎng)：取屎腸球菌的基礎(chǔ)種子無菌條件下接種于MRS培養(yǎng) 基的斜面進(jìn)行純培養(yǎng)，試管于37℃-40℃靜置培養(yǎng)24-48小時(shí)，鏡檢合格后， 作為一級(jí)生產(chǎn)種子；

二級(jí)生產(chǎn)種子培養(yǎng)：取一級(jí)生產(chǎn)種子斜面，向菌種斜面中加入無菌生理 鹽水將斜面上的菌落洗下，按照1％的接種量接種到二級(jí)種子培養(yǎng)液中，每瓶 的裝液量為300-400mL，37℃-40℃靜置培養(yǎng)14-16小時(shí)，鏡檢無雜菌，且菌 體處于分裂期，檢驗(yàn)合格后，作為二級(jí)生產(chǎn)種子；

三級(jí)生產(chǎn)種子培養(yǎng)：取二級(jí)種子培養(yǎng)液按照5-10％的接種量接種到三級(jí) 種子培養(yǎng)液中，發(fā)酵溫度為37℃-40℃，pH控制在7.0，攪拌轉(zhuǎn)速為50r/min， 培養(yǎng)6-8小時(shí)，發(fā)酵過程中罐壓設(shè)定為0.05mpa，當(dāng)糖的含量低于0.6％，且 鏡檢無雜菌時(shí)，轉(zhuǎn)種進(jìn)行上罐發(fā)酵；

上罐發(fā)酵：取三級(jí)種子培養(yǎng)液按照5-10％的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)罐中， 發(fā)酵溫度為37℃-40℃，pH控制在6.5，攪拌轉(zhuǎn)速為150r/min，發(fā)酵過程中 溶氧量控制在10％以上，根據(jù)溶氧加大罐壓，罐壓最高不超過0.1mpa；當(dāng)糖 含量低于1.0％時(shí)采用流加方式進(jìn)行補(bǔ)料，當(dāng)糖含量不再降低、菌濁度不再增 加，且鏡檢無雜菌時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束。