[發明專利]一種屎腸球菌、其高密度發酵培養方法及由其制備的微生態制劑

有效

• 申請號: 201810363737.8
• 申請日: 2018-04-22
• 公開（公告）號: CN108641979B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 馬豐英;蔣貽海;王艷玲;周英俊;崔栩;王宏華;武利利;孫亞磊;劉元元;魏波
• 申請（專利權）人: 青島蔚藍生物股份有限公司;青島動保國家工程技術研究中心有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;A23K10/18;C12R1/01
• 代理公司: 37256 青島清泰聯信知識產權代理有限公司
• 代理人: 李祺;高洋

1.一株屎腸球菌，其特征在于，所述屎腸球菌Enterococcus faecium為E13-5，保藏編號為CCTCC M2017191。

2.根據權利要求1所述的屎腸球菌Enterococcus faecium E13-5的高密度發酵培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

一級生產種子培養：取屎腸球菌的基礎種子無菌條件下接種于MRS培養基的斜面進行純培養，試管于37℃-40℃靜置培養24-48小時，鏡檢合格后，作為一級生產種子；

二級生產種子培養：取一級生產種子斜面，向菌種斜面中加入無菌生理鹽水將斜面上的菌落洗下，按照1％的接種量接種到二級種子培養液中，每瓶的裝液量為300-400mL，37℃-40℃靜置培養14-16小時，鏡檢無雜菌，且菌體處于分裂期，檢驗合格后，作為二級生產種子；

三級生產種子培養：取二級生產種子液按照5-10％的接種量接種到三級種子培養液中，發酵溫度為37℃-40℃，pH控制在7.0，攪拌轉速為50r/min，培養6-8小時，發酵過程中罐壓設定為0.05mpa，當糖的含量低于0.6％，且鏡檢無雜菌時，轉種進行上罐發酵；

上罐發酵：取三級種子培養液按照5-10％的接種量接種到發酵培養罐中，發酵溫度為37℃-40℃，pH控制在6.5，攪拌轉速為150r/min，發酵過程中溶氧量控制在10％以上，根據溶氧加大罐壓，罐壓最高不超過0.1mpa；當糖含量低于1.0％時采用流加方式進行補料，當糖含量不再降低、菌濁度不再增加，且鏡檢無雜菌時，發酵培養結束。

3.根據權利要求2所述的高密度發酵培養方法，其特征在于，以質量份數計，所述二級種子培養液的配方包括1％葡萄糖、1％蛋白胨、1％酵母浸粉和4％微量鹽，pH7.0；所述三級種子培養液的配方包括2％葡萄糖、1.5％蛋白胨、1.5％酵母浸粉和4％微量鹽，pH7.0。

4.根據權利要求2所述的高密度發酵培養方法，其特征在于，以質量份數計，上罐發酵時使用的發酵培養液配方包括2％葡萄糖、2％蛋白胨、2％酵母浸粉和4％微量鹽，pH7.0。

5.根據權利要求2所述的高密度發酵培養方法，其特征在于，上罐發酵時的補料參數控制為：糖含量控制范圍為0.5-1.0％，蠕動泵的轉速為120-150rpm，補料周期為100s，開度為50-60s。

6.一種以權利要求1所述的屎腸球菌Enterococcus faecium E13-5為主要原料制備得到的微生態制劑。

7.根據權利要求6所述的微生態制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

取預定量的屎腸球菌Enterococcus faecium E13-5在轉速10000r/min條件下進行離心，得到菌泥，將菌泥與保護劑以質量比1:3的比例進行充分混合，然后進行凍干，并將凍干后的菌泥與輔料進行充分攪拌混合，得到微生態制劑。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，以質量份數計，所述保護劑包括5％蔗糖、4％山梨醇、3％脫脂奶粉、1％明膠和0.5％Vc，所述輔料包括49％淀粉、20％乳糖、15％糊精、10％聚維酮K30、5％微晶纖維素和1％氯化鹽。

9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，將與保護劑充分混合的菌泥在以下條件依次進行凍干：在-40℃預凍3-4小時，在-40℃至-45℃以下抽真空至20Pa左右，在5℃升華干燥20-24小時，在0℃升華干燥8-10小時，在25℃解析干燥4-6小時，最后關閉真空2-4小時。