[發明專利]一種亮丙瑞林的固液合成方法

有效

• 申請號: 201810363465.1
• 申請日: 2018-04-21
• 公開（公告）號: CN110386964B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 張建松;李新宇;張利香
• 申請（專利權）人: 深圳市健元醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
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本發明公開了一種亮丙瑞林的固液合成方法，包括如下步驟：采用HMBA?linker偶聯AM?Resin得到HMBA?Linker?AM?Resin，再將液相合成的二肽應用到固相合成中，得到全保護的肽樹脂；將肽樹脂用乙胺溶液胺解得到末端乙胺化的全保護肽，經三氟乙酸脫保護得到粗肽；將粗肽經過高效液相色譜制備得到高質量的精肽。本發明提供的亮丙瑞林的固液合成方法有效解決了現有技術偶聯不穩定的問題，避免了二酮哌嗪副反應，保證了固相合成的收率及粗肽的純度，簡化了反應操作，提高了收率，并且避免了現有工藝報道液相縮合乙胺鹽酸鹽的消旋副反應；與現有技術相比反應操作簡單、原料投入少、成本低、收率高，容易達到產業化的要求，具有廣泛的市場前景。

技術領域

本發明涉及一種多肽的合成方法，特別涉及一種亮丙瑞林的固液合成方法。

背景技術

亮丙瑞林，英文名Leuprorelin，化學名：5-氧代-脯氨酰-組氨酰-色氨酰-絲氨酰-酪氨酰-D-亮氨酰-亮氨酰-精氨酰-N-乙基-脯氨酰胺，CAS號：53714-56-0，肽序：H-Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅，分子式：C₅₉H₈₄N₁₆O₁₂，分子量：1209.41。

亮丙瑞林是一種促性腺激素釋放激素類似物，主要作用于垂體前葉，大劑量應用初期可以引起一過性黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)釋放增多，后期則導致垂體敏感性降低，使LH、FSH和性激素分泌減少。亮丙瑞林用于治療相關性激素病癥，包括：晚期前列腺癌、子宮內膜異位、中樞性性早熟癥。

原研廠家武田化工發表專利US4008209，專利中的方法是將Boc-Pro-OH通過三乙胺連接到氯甲基聚苯乙(Merrified)樹脂上，采取Boc路線依次連接完相應的氨基酸后，在低溫下用乙胺胺解樹脂，用甲醇提取全保護肽后，濃縮至干，再經HF(氟化氫氣體)脫除側鏈保護基團得到目的產物。此種通過Boc策略合成肽樹脂，每一步的脫保護均需要用到強腐蝕性、強酸性的三氟乙酸溶液，以及樹脂的裂解需用到高危試劑氟化氫，故危險系數高、三廢處理量大、收率低、成本高，不利于工業化放大。

國內專利CN1865280A提到采取Wang樹脂或CTC樹脂及專利CN101538315B提到的HMPB-AM樹脂為起始原料，按照Fmoc策略，依次偶聯帶保護基團的氨基酸，獲得保護九肽樹脂，用三氟乙酸裂解得到脫側鏈保護基團的線性肽，再與乙胺縮合得到亮丙瑞林粗品。這些方法主要存在以下缺陷：采取CTC樹脂為起始樹脂，Fmoc固相合成策略，由于CTC?Resin本身的不穩定性，批次間偶聯收率不穩定，不利于工業化放大；采取Wang?Resin或者HMPB-AM樹脂為起始樹脂，Fmoc固相合成策略合成全保護九肽，無法避免二酮哌嗪副反應(DKP副反應)，偶聯過程中造成肽鏈脫落，顯著降低收率，成本高，無法進行工業化生產。裂解的全保護肽采用液相合成的方法與乙胺鹽酸鹽縮合，副反應產生的雜質不易制備純化，降低產品的收率。

發明內容

本發明的目的是提供一種操作簡單、成本低、收率高、易達到產業化要求的亮丙瑞林合成工藝，本發明主要解決現有技術偶聯不穩定，以及合成中因二酮哌嗪副反應導致的合成收率及粗肽純度低的問題。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案，包括以下步驟：

1.在縮合劑作用下，由Fmoc-Leu-OH與HOPFP在縮合劑作用下得到Fmoc-Leu-OPFP；Fmoc-Leu-OPFP與H-Arg(Pbf)-OH在堿作用下反應生成Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-OH；

2.以AM?Resin為起始樹脂，與HMBA?Rinker偶聯后得到HMBA?AM?Resin，再與保護氨基酸Fmoc-Pro-OH縮合得到Fmoc-Pro-HMBA?AM?Resin；