[發(fā)明專利]一種免栽培快速獲取花魔芋組織塊的發(fā)酵生產(chǎn)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810363230.2
• 申請(qǐng)日: 2018-04-21
• 公開（公告）號(hào): CN108419677A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 褚洪龍;李竹梅;唐利洲;劉潮;王海波;高永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 曲靖師范學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 云南省曲靖市專利事務(wù)所 53104
• 代理人: 周厚明

1.一種免栽培快速獲取花魔芋組織塊的發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一 采集外植體類型為球莖上新發(fā)的小塊莖，將小塊莖放入無菌蒸餾水中浸泡30min后，用75%的乙醇消毒30 s，再用3%過氧化氫消毒20 min，然后用無菌蒸餾水沖洗5遍去除小塊莖表面的過氧化氫；

步驟二 在無菌條件下將小塊莖用解剖刀去皮并切成長(zhǎng)約0.5 cm×0.5 cm的小塊，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，置于24~26 ℃、濕度65~75%的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)12~18天；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.50 mg/L+NAA 0.10 mg/L+5 g/L葡萄糖+15 g/L蔗糖+7.8 g/L瓊脂粉，滅菌前pH調(diào)至5.8~6.0；

步驟三 將愈傷組織轉(zhuǎn)入愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，每皿接種3~5個(gè)切成直徑為0.2~0.5cm的愈傷組織小塊，置于24~26 ℃、濕度65~75%的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)；10天后，愈傷組織長(zhǎng)至1~1.5 cm的淡黃色球狀體；愈傷組織增殖培養(yǎng)基為：MS+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+5 g/L 葡萄糖+15 g/L蔗糖+7.8 g/L瓊脂粉，滅菌前pH調(diào)至5.8~6.0；

步驟四 將擴(kuò)繁的愈傷組織塊切成直徑為0.2~0.4 cm的愈傷組織小塊，轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件設(shè)置為22~26 ℃，O₂濃度為8~9 mg/L，pH為5.8~6.0；液體培養(yǎng)基為：NH₄NO₃ 650 mg/L，KNO₃ 900 mg/L，CaCl₂·2H₂O 440 mg/L，MgSO₄·7H₂O 370 mg/L，KH₂PO₄ 700 mg/L，KI 0.83 mg/L，H₃BO₃ 6.2mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.3 mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，Na₂MnO₄·2H₂O 0.25 mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025 mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025 mg/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O（27.8 mg/L）+Na₂-EDTA·2H₂O（37.3 mg/L），肌醇100 mg/L，煙酸0.5 mg/L，鹽酸吡哆醇（維生素B6）0.5 mg/L，鹽酸硫胺素（維生素B1）0.5 mg/L，甘氨酸2 mg/L，15 g/L蔗糖；培養(yǎng)45~60天，期間根據(jù)花魔芋組織塊生長(zhǎng)情況更換發(fā)酵液一次；所述魔芋組織塊發(fā)酵液在115 ℃、67 Kpa下滅菌15 min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述免栽培快速獲取花魔芋組織塊的發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于獲得的組織塊為直徑3~5 cm的球狀組織塊。