[發明專利]一種篩選異種移植供體豬最佳基因組合的方法

在審

• 申請號: 201810362449.0
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108342491A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 魏紅江;趙紅業;角德靈;李鴻輝;趙恒
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京名華博信知識產權代理有限公司 11453
• 代理人: 李中強

1.一種篩選異種移植供體豬最佳基因組合的方法，其特征在于：具體步驟為：

1）建立人成纖維細胞體外相容性評價平臺

以人成纖維細胞作為實驗對象，進行人血清介導的細胞增殖實驗，人血清介導的細胞毒性實驗，補體活化檢測、抗體結合實驗、補體活性抑制檢測等免疫檢測實驗，再進行凝血反應檢測和淋巴細胞活性檢測，以樣本每項檢測結果的平均值記為100分，并列出相應的評分標準，建立人成纖維細胞體外相容性評價體系；

2）初步建立基因修飾異種移植供體豬最佳基因組合早期快速篩選平臺

以國際上已報道的心臟移植存活時間相對較長的基因修飾豬成纖維細胞為研究對象，用人的補體對細胞進行孵育，利用多功能酶標儀檢測補體處理后細胞存活情況，將基因修飾的豬成纖維細胞在人混合血清中培養，收集血清，檢測血清中補體、免疫球蛋白的消耗情況，結果判定時以人的成纖維細胞作為參考值，不同基因修飾豬成纖維細胞根據不同的實驗結果記相應的分值，初步建立基因修飾異種移植供體豬最佳基因組合早期快速篩選平臺；

3）利用已初步建立的評價體系對不同基因組合修飾的細胞進行評估

在GTKO的基礎上，采用2個補體調節因子hCD55、hCD46，3個凝血調節因子hTBM、CD73、TFPI，4個細胞免疫應答調節因子CⅡTA、B2M、LEA29Y、CD47，2個抗凋亡因子A20、HO-1，根據相同基因數量不同基因類型組合方法或不同基因數量不同基因類型組合方法獲得多基因修飾豬成纖維細胞，利用已初步建立的基因修飾異種移植供體豬最佳基因組合早期快速篩選平臺，對上述多基因修飾的豬成纖維細胞記分后進行早期篩選，從中篩選出3種以上的最佳的基因修飾組合。

2.根據權利要求1所述的一種建立異種移植供體豬最佳基因組合篩選平臺的方法，其特征在于：步驟1）中，人成纖維細胞為人自愿捐獻，且個體間體重差不超過±20%，血型要求為同型血。