[發(fā)明專利]5-氨基乙酰丙酸高產(chǎn)菌株及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810362420.2 | 申請日： | 2018-04-20 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108517327B | 公開（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 鄭平;陳久洲;孫際賓;周文娟;孫村民;郭軒;馬延和 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/70 | 分類號(hào)： | C12N15/70;C12N15/77;C12N15/74;C12N1/21;C12P13/00 |
| 代理公司： | 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;徐迅 |
| 地址： | 300308 天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 氨基 乙酰 丙酸 高產(chǎn) 菌株 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株的構(gòu)建方法，所述方法包括：
使得所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株的乙醛酸循環(huán)弱化，所述乙醛酸循環(huán)弱化是指乙醛酸循環(huán)所涉及的異檸檬酸裂解酶和/或蘋果酸合酶的活性部分或完全缺失；
所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株本身表達(dá)ALA合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶；或者所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中ALA合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活性增強(qiáng)；
所述菌株是：大腸桿菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)、球形紅細(xì)菌(Rhodobacter sphaeroides)或沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。
2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中ALA合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活性增強(qiáng)通過以下方法之一或組合實(shí)現(xiàn)：表達(dá)同源或異源ALA合成酶和酸烯醇式丙酮酸羧化酶的編碼基因，和/或增加所述菌株中所述編碼基因的拷貝數(shù)，和/或改造所述編碼基因的啟動(dòng)子以增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)速度，和/或修改攜帶有所述編碼基因的信使RNA的翻譯調(diào)控區(qū)以增強(qiáng)翻譯強(qiáng)度。
3.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括：
1)使得所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株表達(dá)ALA合成酶或增強(qiáng)所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中ALA合成酶的活性；
2)使得所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株表達(dá)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶或增強(qiáng)所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活性；和
3)使得所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中乙醛酸循環(huán)弱化。
4.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法還包括使得所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株表達(dá)ALA外排蛋白或增強(qiáng)所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中ALA外排蛋白的活性；
所述ALA外排蛋白是指其功能是將合成的ALA從胞內(nèi)排出的蛋白；
所述ALA外排蛋白為大腸桿菌來源的蘇氨酸/高絲氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白R(shí)htA，其序列如SEQ IDNO:1所示；或半胱氨酸/O-乙酰絲氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白EamA，其序列如SEQ ID NO:2所示。
5.如權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述ALA外排蛋白是EamA。
6.一種5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株，所述菌株中乙醛酸循環(huán)弱化，所述乙醛酸循環(huán)弱化是指乙醛酸循環(huán)所涉及的異檸檬酸裂解酶和/或蘋果酸合酶的活性部分或完全缺失；所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株本身表達(dá)ALA合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶；或者所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株中ALA合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活性增強(qiáng)；
所述菌株是：大腸桿菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)、球形紅細(xì)菌(Rhodobacter sphaeroides)或沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。
7.一種5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株，其特征在于，所述5-氨基乙酰丙酸生產(chǎn)菌株：
1)表達(dá)ALA合成酶或ALA合成酶的活性增強(qiáng)；
2)表達(dá)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶或磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活性增強(qiáng)；和
3)乙醛酸循環(huán)弱化；所述乙醛酸循環(huán)弱化是指乙醛酸循環(huán)所涉及的異檸檬酸裂解酶和/或蘋果酸合酶的活性部分或完全缺失；
所述菌株是：大腸桿菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)、球形紅細(xì)菌(Rhodobacter sphaeroides)或沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。
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