[發(fā)明專利]一種線性擴(kuò)增雙鏈DNA的方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810361588.1
• 申請(qǐng)日: 2018-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110387399B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王力剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京全譜醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806
• 代理公司: 北京卓孚律師事務(wù)所 11821
• 代理人: 謝夢(mèng)欣

1.一種線性擴(kuò)增雙鏈DNA的方法，所述方法包括：

(a)對(duì)雙鏈DNA進(jìn)行末端修復(fù)及加A，

(b)將經(jīng)歷末端修復(fù)及加A的雙鏈DNA的一端通過(guò)連接酶反應(yīng)加上為雙鏈的接頭，

(c)使用RNA聚合酶擴(kuò)增產(chǎn)生大量RNA，

(d)使用SEQ?ID?NO.?5所示的逆轉(zhuǎn)錄引物逆轉(zhuǎn)錄成DNA，

(e)使用SEQ?ID?NO.?6所示的二鏈合成引物擴(kuò)增DNA，

其中，所述雙鏈DNA為分離的游離DNA且長(zhǎng)度在150bp至300bp之間，

所述為雙鏈的接頭由SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.2所示序列的核苷酸序列退火形成，和由SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.4所示序列的核苷酸序列退火形成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，雙鏈DNA為具有平末端或粘性末端的DNA片段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，RNA聚合酶選自：T7?RNA聚合酶、T3?RNA聚合酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，RNA聚合酶擴(kuò)增為，RNA聚合酶以帶有啟動(dòng)子片段的DNA序列為模板，重復(fù)合成RNA的過(guò)程。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，逆轉(zhuǎn)錄為使用逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板，使用特異性通用引物合成DNA的過(guò)程。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，逆轉(zhuǎn)錄酶選自：MMLV、AMV。