[發明專利]肺小細胞癌早期特異性自身抗體panel診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201810361372.5
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108548923B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 杜娟
• 申請（專利權）人: 山東省千佛山醫院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

1.一種早期診斷肺小細胞癌的標志物組合，其特征在于，該組合為血清中的KRT8自身抗體、CDC20 自身抗體和POLDIP3自身抗體的組合。

2.權利要求1所述的標志物組合在小細胞肺癌的早期診斷試劑或試劑盒中的應用。

3.一種用于早期診斷肺小細胞癌的試劑盒，其特征在于，包括產生KRT8、CDC20和POLDIP3自身抗體的抗原。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括1M碳酸氫鈉緩沖液，PBST緩沖液，酶標抗體，TMB底物，終止液，ELISA panel板。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述PBST是含5％脫脂奶粉的PBST。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述含5％脫脂奶粉的PBST配制方法為：取5 g脫脂奶粉，加入100 ml PBST中，配制成為5％脫脂奶粉的PBST。

7.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標抗體為HRP標記的抗待測抗體的種屬來源的IgG的抗體。

8.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述終止液為2M H₂SO₄終止液。

9.如權利要求3～8任一項所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒的操作方法為：

1）包被：用1M的碳酸氫鈉緩沖液將肺癌抗原KRT8 、CDC20 和POLDIP3分別以

5 ug/ml、5 ug/ml和2.5 ug/ml的最佳包被濃度包被于ELISA板，4℃過夜，然后使用5%脫脂奶粉的PBST封閉1.5小時；

2）加樣：用含5％脫脂奶粉的PBST將待測樣品血清1：100稀釋，然后取100 μL/孔加入上述包被有抗原的微孔板中，37℃孵育30 min，PBST洗滌5遍；

3）加HRP標記的抗體：除空白孔外，各反應孔中分別加入100 μl HRP標記的抗待測抗體的種屬來源的IgG的抗體，37℃孵育30 min，去除液體，并用PBST洗滌5遍；

4）加顯色底物：在各反應孔中加入TMB底物，37℃顯色15 min；

5）終止反應：在各反應孔中加入2M H₂SO₄終止液；

6）結果判定：在MD-SpectraMax M5多功能酶標儀上，于波長450 nm和630 nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，將三種標志物的OD值帶入方程，得到的p值≥cutoff值0.43，即為陽性結果，當p值＜cutoff值0.43時，為陰性結果；

步驟6）所述方程為采用logistic回歸方法建立回歸方程，具體為：

ln（p/1-p)=0.727+46.3×OD_POLDIP3+29.43× OD_CDC20+20.53×OD_KRT8。