[發明專利]一種利用CRISPR/Cas9編輯大白豬CD163基因的方法在審
申請號: | 201810361147.1 | 申請日: | 2018-04-20 |
公開(公告)號: | CN108753832A | 公開(公告)日: | 2018-11-06 |
發明(設計)人: | 何祖勇;郭春和;劉小鳳;叢佩清;王敏;劉小紅;陳瑤生 | 申請(專利權)人: | 中山大學 |
主分類號: | C12N15/90 | 分類號: | C12N15/90;C12N15/113;C12N15/85 |
代理公司: | 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100 | 代理人: | 劉婉 |
地址: | 510275 *** | 國省代碼: | 廣東;44 |
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摘要: | |||
搜索關鍵詞: | 基因 外顯子 核苷酸序列 生物學功能 高致病性 細胞表面 胞外域 毒株 敲除 抵抗 | ||
1.一種利用CRISPR/Cas9編輯大白豬CD163基因的方法,其特征在于:利用CRISPR/Cas9編輯大白豬CD163基因,破壞CD163受體胞外域SRCR5,敲除所述CD163基因第7個外顯子DNA片段,所述CD163基因的第7個外顯子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:用于敲除所述CD163基因的所述第7個外顯子的gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
3.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于,通過CRISPR/Cas9進行基因編輯的步驟如下:
將核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的gRNA-10構建到能表達Cas9蛋白的pX458載體上,得到pX458-gRNA-10;將核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的gRNA-134構建到能表達Cas9蛋白的pX458R載體上,得到pX458R-gRNA-134,其包括兩種能夠特異性識別CD163基因并對識別位點進行打靶的CRISPR/Cas9系統;將所述pX458-gRNA-10和所述pX458R-gRNA-134共轉染豬的離體胎兒腎細胞,分別打靶CD163基因上相應gRNA所識別的位點,從而刪除所述CD163基因上兩條gRNA所識別位點的中間序列,實現所述CD163基因第7個外顯子的DNA片段的精確刪除。
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