[發明專利]一種快速區分葡萄球菌的方法

在審

• 申請號: 201810360633.1
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108715886A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 朱榮進;黃任;楊春
• 申請（專利權）人: 江蘇華創檢測技術服務有限公司
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12P7/06;G01N30/02;C12R1/445;C12R1/44
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種快速區分葡萄球菌的方法,包括如下步驟：步驟一、胰蛋白胨大豆肉湯培養基配制；步驟二、測定步驟：a.金黃色葡萄球菌培養、b.葡萄球菌發酵產物處理、c.采用氣相色譜條件進行檢測、d.結果判斷。本發明利用新的氣相色譜檢測方法，突破了傳統生化檢測葡萄球菌耗時長，金黃色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌生物學形態相似的缺點，能夠快速精準地區分出葡萄球菌。

技術領域

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種快速區分葡萄球菌的方法。

背景技術

金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的形態特征為：菌落直徑為2-3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一渾濁帶，在其外圈有一透明圈，沃氏葡萄球菌在Baird-Parker平板上的形態特征為：菌落直徑為2-3mm，顏色呈灰黑色，周圍為一渾濁帶，兩種葡萄球菌在培養皿上很難區分。

發明內容

發明目的：為了解決現有技術的不足，本發明提供了一種快速區分葡萄球菌的方法。該方法采用一種新的氣相色譜檢測方法對金黃色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌進行檢測，能夠快速準確地區分葡萄球菌。

技術方案：一種快速區分葡萄球菌的方法，包括如下步驟：

步驟一、胰蛋白胨大豆肉湯培養基配制：

稱取胰蛋白胨17g，植物蛋白胨3g，氯化鈉5g，葡萄糖2.5g，磷酸氫二鉀2.5g，加入1000ml蒸餾水，分裝到500ml錐形瓶中，在120℃的滅菌鍋內濕熱滅菌20min既得；

步驟二、測定步驟：

a.金黃色葡萄球菌培養、

將金黃色葡萄球菌接種到有225ml的胰蛋白胨大豆肉湯培養基的無菌錐形瓶中，震蕩均勻，在35℃，120r/min的恒溫搖床中培養18-24h；

b.葡萄球菌發酵產物處理

將培養完成的金黃色葡萄球菌在8000r/min的條件下離心10min，取得上清液，取2.5ml上清液加入2.5ml二硫化碳，靜置分層后取二硫化碳液體進行檢測。同樣以胰蛋白胨大豆肉湯培養基為空白，取2.5ml培養基加入2.5ml2.5ml二硫化碳，靜置分層后取二硫化碳液體作為空白對照；

c.采用氣相色譜條件進行檢測

采用如下氣相色譜條件進行檢測：色譜柱：TG-WAXMS毛細管色譜柱：30m×0.25mm×0.25μm；溫度為：柱箱恒溫40℃保持1min，以每分鐘10℃的速率升溫至80℃；分流進樣5:1；隔墊吹掃3ml/min，進樣口220℃，檢測器230℃；載氣為高純氮，載氣流速1.2ml/min；進樣量(μl)：1.0；

d.結果判斷

若樣品中能夠檢測到乙醇，則說明該菌株為金黃色葡萄球菌。

作為優化：所述的快速區分葡萄球菌的方法的儀器如下：氣相色譜儀；超凈臺，恒溫培養箱，恒溫搖床。

作為優化：所述的快速區分葡萄球菌的方法的主要材料和試劑如下：胰蛋白胨、植物蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、磷酸氫二鉀、瓊脂、二硫化碳。

有益效果：本發明利用新的氣相色譜檢測方法，突破了傳統生化檢測葡萄球菌耗時長，金黃色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌生物學形態相似的缺點，能夠快速精準地區分出葡萄球菌。

具體實施方式

下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，以使本領域的技術人員能夠更好的理解本發明的優點和特征，從而對本發明的保護范圍做出更為清楚的界定。本發明所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例，基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。