[發(fā)明專利]樹枝狀分子類陽離子脂質(zhì)、轉(zhuǎn)基因載體及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810359941.2
• 申請(qǐng)日: 2018-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN108395411B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 騫愛榮;高永光;黨凱;田野;張文娟;姜山峰;趙欣;羅曉慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北工業(yè)大學(xué);西安九清生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07D249/04
• 分類號(hào): C07D249/04;C12N15/85
• 代理公司: 西安啟誠專利知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61240
• 代理人: 馮亮

本發(fā)明提供一種樹枝狀分子類陽離子脂質(zhì)以及含有該陽離子脂質(zhì)的轉(zhuǎn)基因載體。本發(fā)明還公開了所述陽離子脂質(zhì)和轉(zhuǎn)基因載體的制備方法。本發(fā)明提供的陽離子脂質(zhì)由不同長度的烴基鏈、苯環(huán)、三氮唑以及樹枝狀分子組成，與輔助脂質(zhì)二油酰磷脂酰乙醇胺作用后所形成的陽離子脂質(zhì)體對(duì)DNA具有很好的阻滯性能，且具有較低的細(xì)胞毒性，同時(shí)具有較高的轉(zhuǎn)染效率，陽離子脂質(zhì)和轉(zhuǎn)基因載體的制備方法簡單、成熟、易于掌控。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及陽離子脂質(zhì)以及轉(zhuǎn)基因載體，具體涉及一種同時(shí)含有烴基鏈、苯環(huán)、三氮唑以及樹枝狀分子的陽離子脂質(zhì)、含該類陽離子脂質(zhì)的轉(zhuǎn)基因載體及其制備方法。

背景技術(shù)

基因治療作為最前沿的醫(yī)學(xué)手段之一，已經(jīng)在癌癥以及艾滋病等各類重大疾病的治療中顯示出巨大的威力。在基因治療過程中，基因載體扮演著十分重要的角色。

裸露的DNA比較松散、體積較大，一般以舒展的線型螺旋形式存在，而且具有負(fù)電性，因此自身很難跨膜進(jìn)入細(xì)胞，即使有少量DNA進(jìn)入細(xì)胞，在到達(dá)細(xì)胞核表達(dá)之前，也很容易被細(xì)胞內(nèi)的核酸酶降解。這些不利因素都使得DNA分子在不借助其它技術(shù)手段的情況下，很難進(jìn)行有效地基因轉(zhuǎn)染，因此發(fā)展安全有效的基因載體是基因治療成功的前提條件。

基因載體包括兩大類：病毒載體和非病毒載體。病毒載體具有轉(zhuǎn)染效率高、靶向性好等優(yōu)點(diǎn)。但是潛在的免疫反應(yīng)以及載量小等缺點(diǎn)極大地限制了其在臨床中的應(yīng)用。非病毒載體完全可以克服病毒載體的上述缺點(diǎn)，具有載量大、安全性高、結(jié)構(gòu)易于修飾等優(yōu)點(diǎn)，因此得到了研究者的廣泛關(guān)注。

樹枝型分子PAMAM含有較多的正電荷可以與帶負(fù)電的DNA相互作用。作為基因載體，它具有較強(qiáng)的質(zhì)子海綿效應(yīng)，當(dāng)溶酶體內(nèi)的pH值下降時(shí)，PAMAM能夠吸收大量質(zhì)子，導(dǎo)致溶酶體破裂，并釋放DNA到細(xì)胞質(zhì)。但是其最大的缺點(diǎn)就是毒性較大。隨著分子量的增加，正電荷密度增大，細(xì)胞毒性也增大。低分子量的PAMAM細(xì)胞毒性較低，但是轉(zhuǎn)染效率也低。因此，對(duì)低分子量的樹枝型分子PAMAM進(jìn)行修飾，可有效提高轉(zhuǎn)染效率，降低細(xì)胞毒性。

發(fā)明內(nèi)容

作為各種廣泛且細(xì)致的研究和實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，低分子量PAMAM經(jīng)不同長度烴基鏈修飾之后，表現(xiàn)出較低的細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染效率與烴基鏈的長度有很大關(guān)系：隨著烴基鏈的增加，轉(zhuǎn)染效率增加，含有不飽和鍵的載體轉(zhuǎn)染效率高于含有飽和鍵的載體?；谶@種發(fā)現(xiàn)，完成了本發(fā)明。

本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種具有多功能的樹枝狀分子類陽離子脂質(zhì)的轉(zhuǎn)基因載體，不僅具有低的細(xì)胞毒性，而且同時(shí)具有較高的轉(zhuǎn)染效率，以促進(jìn)基因治療的發(fā)展。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供含樹枝狀分子類陽離子脂質(zhì)的制備方法以及含有該陽離子脂質(zhì)的轉(zhuǎn)基因載體的制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種樹枝狀分子類陽離子脂質(zhì)，所述陽離子脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)式(1)如下：

式(1)中，R₁為烴基鏈，R₂為低代樹枝狀聚酰胺分子。