[發明專利]樹枝狀分子類陽離子脂質、轉基因載體及其制備方法

有效

• 申請號: 201810359941.2
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108395411B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 騫愛榮;高永光;黨凱;田野;張文娟;姜山峰;趙欣;羅曉慶
• 申請（專利權）人: 西北工業大學;西安九清生物科技有限公司
• 主分類號: C07D249/04
• 分類號: C07D249/04;C12N15/85
• 代理公司: 西安啟誠專利知識產權代理事務所(普通合伙) 61240
• 代理人: 馮亮

1.一種樹枝狀分子類陽離子脂質，其特征在于，所述陽離子脂質的結構式(1)如下：

式(1)中，R₁為CH₃(CH₂)₂CH₂，CH₃(CH₂)₆CH₂，CH₃(CH₂)₁₀CH₂，CH₃(CH₂)₁₆CH₂，CH₃(CH₂)₇CHCH(CH₂)₇CH₂中的一種，R₂為低代樹枝狀聚酰胺分子。

2.根據權利要求1所述的樹枝狀分子類陽離子脂質，其特征在于，R₂為

3.一種制備如權利要求1或2中所述的樹枝狀分子類陽離子脂質的方法，其特征在于，所述陽離子脂質的合成路線如下：

所述方法具體包括：

步驟一、按比例稱取式2化合物、脂肪胺R₁NH₂、催化劑、縮合劑和有機堿，加入溶劑溶解，在氮氣氛圍下反應8～10小時，反應結束后，減壓濃縮，柱層析分離得到式3化合物；

步驟二、步驟一得到的式3化合物與Boc保護的炔丙胺式4化合物溶于四氫呋喃溶劑中得四氫呋喃溶液，將溶有硫酸銅和維生素C的水溶液加入所述四氫呋喃溶液中，室溫下反應15～20小時，反應結束后，減壓濃縮，柱層析分離所得化合物加入到氯化氫的飽和乙酸乙酯溶液中，室溫攪拌反應0.5～1小時，將溶劑濃縮，真空干燥18～24小時，得到式1化合物陽離子脂質。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步驟一中，所述催化劑為1-羥基苯并三唑，所述縮合劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸，所述有機堿為三乙胺，所述式2化合物、脂肪胺R₁NH₂化合物，1-羥基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸和三乙胺的物質的量的比為1:1:2:2:3，柱層析分離中采用的洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的體積比為4:1。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步驟二中，所述四氫呋喃溶液中的四氫呋喃和所述水溶液中的水的體積比為2:1，所述式3化合物與所述式4化合物的摩爾比為1:2.2，所述柱層析分離中采用的洗脫劑為二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇的體積比為10:1。

6.一種轉基因載體，其特征在于，包括二油酰磷脂酰乙醇胺、高純滅菌緩沖液和權利要求1所述的陽離子脂質。

7.根據權利要求6所述的轉基因載體，其特征在于，所述陽離子脂質的摩爾濃度為1.0mM，所述陽離子脂質與所述二油酰磷脂酰乙醇胺的摩爾比為1:6。

8.一種制備如權利要求7所述的轉基因載體的方法，其特征在于，所述方法具體包括：將所述陽離子脂質、二油酰磷脂酰乙醇胺與無水氯仿加入到高溫滅菌的燒瓶中，溶解后減壓濃縮得到脂質體膜，將所述脂質體膜真空干燥去除殘留氯仿，干燥后的脂質體膜與預先預熱到70℃的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液混合配成所需濃度的溶液，超聲得到所述轉基因載體。

9.如權利要求1所述的陽離子脂質在制備轉基因載體中的應用。