[發明專利]一種利用纖維素固定化CBD-EndoS融合酶的方法有效
| 申請號： | 201810358946.3 | 申請日： | 2018-04-20 |
| 公開（公告）號： | CN108623696B | 公開（公告）日： | 2021-05-28 |
| 發明（設計）人： | 吳志猛;周志昉;趙愷 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N11/12 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 纖維素 固定 cbd endos 融合 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種酶的固定化方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)制備含有氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的雙功能融合蛋白粗酶液；
(2)將Sigmacell Cellulose纖維素微球入KPB緩沖液預處理5～15min，離心棄上清，得到預處理后的纖維素微球；
(3)將步驟(2)制備得到的預處理后的纖維素微球、100mM NaCl添加至步驟(1)得到的粗酶液中，在pH 6.0，20℃條件下固定30min，制備得到固定化酶。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述雙功能融合蛋白的構建方法為，將編碼糖苷內切酶的基因片段，定向克隆至含有纖維素結合域的pET系列載體，構建具有纖維素結合活性和糖苷內切活性的雙功能融合蛋白CBD-EndoS的載體，并轉入細胞中，培養細胞，收集細胞產生的雙功能融合蛋白。
3.應用權利要求1或2所述方法制備的固定化酶。
4.權利要求3所述的固定化酶在食品、生物、醫藥、化工領域中的應用。
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