[發明專利]一種基于蘋果轉錄因子ERF4第225位的氨基酸殘基種類預測蘋果果實硬度的方法

有效

• 申請號: 201810358442.1
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN110387430B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 吳婷;韓振云;胡亞楠;韓振海;張新忠;王憶;許雪峰;呂遠達;孫亞強
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種基于蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類預測蘋果果實硬度的方法。蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類僅為脯氨酸殘基的待測蘋果的果實硬度高于蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類為脯氨酸殘基和丙氨酸殘基的待測蘋果。實驗證明，蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類可以作為檢測對象，預測待測蘋果果實硬度。本發明具有重大的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種基于蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類預測蘋果果實硬度的方法。

背景技術

果實成熟過程中除了色澤發生變化外，質地變化也是果實成熟的一個重要特征。果實質地性狀是一個綜合概念，包括果實的硬度、松實、脆韌、膩粗等特征，是果實采收和貯運過程中品質評價的重要指標。而果實硬度降低后容易受到物理和非物理損傷，如機械傷害和病菌侵染等。

果實硬度高低與細胞壁中半纖維素和果膠的降解緊密相關(Brummell andHarpster，2001；Rose et al.，2004；Ng et al.，2013)，而參與果實軟化過程的基因可以被分為兩類：一類是結構基因，其編碼的蛋白質可以直接參與細胞壁降解，如多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG；Atkinson et al.，2002；Wakasa et al.，2006；Quesada etal.，2009)、果膠甲酯酶(pectin methylesterase，PME；Harriman et al.，1991；Carpitaand Gibeaut，1993)；另一類是調控基因，其編碼的蛋白質可以調控結構基因的轉錄水平。

發明內容

本發明要解決的技術問題是如何預測待測蘋果的果實硬度。蘋果的果實硬度越高，越易貯運。

為解決上述技術問題，本發明提供了預測待測蘋果果實硬度的方法。

本發明提供的預測待測蘋果果實硬度的方法，具體可為方法一，可包括如下步驟：檢測待測蘋果的蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類；“蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類僅為脯氨酸殘基”的待測蘋果的果實硬度高于“蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類為脯氨酸殘基和丙氨酸殘基”的待測蘋果。

本發明提供的預測待測蘋果果實硬度的方法，具體可為方法二，可包括如下步驟：檢測待測蘋果總RNA的特定轉錄本中第225個密碼子的核苷酸序列；所述特定轉錄本可為蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因轉錄得到的RNA，其第1個密碼子為起始密碼子；“特定轉錄本中第225個密碼子的核苷酸序列僅編碼脯氨酸”的待測蘋果的果實硬度高于“特定轉錄本中第225個密碼子的核苷酸序列編碼脯氨酸和丙氨酸”的待測蘋果。

本發明提供的預測待測蘋果果實硬度的方法，具體可為方法三，可包括如下步驟：檢測待測蘋果總DNA中蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因自5’末端起第673位的核苷酸種類；“蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因自5’末端起第673位的核苷酸種類僅為C”的待測蘋果的果實硬度高于“蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因自5’末端起第673位的核苷酸種類為C和G”的待測蘋果。

本發明提供的預測待測蘋果果實硬度的方法，具體可為方法四，可包括如下步驟：提取待測蘋果的總RNA并反轉錄為cDNA，然后采用特異引物對進行PCR擴增，檢測PCR擴增產物；“PCR擴增產物中具有序列表的序列7所示的DNA分子且不具有序列表的序列8所示的DNA分子”的待測蘋果的果實硬度高于“PCR擴增產物中具有序列表的序列7所示的DNA分子且具有序列表的序列8所示的DNA分子”的待測蘋果。

上述方法四中，所述特異引物對可由用于擴增特異DNA片段的兩條引物組成。所述特異DNA片段中具有蘋果基因組中引物F1和引物R1組成的引物對的靶序列。

所述引物F1可為如下h1)或h2)：