[發明專利]一種基于蘋果轉錄因子ERF4第225位的氨基酸殘基種類預測蘋果果實硬度的方法

有效

• 申請號: 201810358442.1
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN110387430B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 吳婷;韓振云;胡亞楠;韓振海;張新忠;王憶;許雪峰;呂遠達;孫亞強
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種預測待測蘋果果實硬度的方法，包括如下步驟：檢測待測蘋果的蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類；

“蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類僅為脯氨酸殘基”的待測蘋果的果實硬度高于“蘋果轉錄因子ERF4自N末端起第225位的氨基酸殘基種類為脯氨酸殘基和丙氨酸殘基”的待測蘋果；

所述蘋果轉錄因子ERF4自N端至C端依次由區段Ⅰ、區段Ⅱ和區段Ⅲ組成；

所述區段Ⅰ為氨基酸序列是序列表中序列3自N末端起第1至224位所示的多肽；

所述區段Ⅱ為脯氨酸殘基或丙氨酸殘基；

所述區段Ⅲ自N端至C端依次為PSEV；

所述待測蘋果為紅富士、紫塞明珠和/或紅富士和紫塞明珠的雜交后代。

2.一種預測待測蘋果果實硬度的方法，包括如下步驟：檢測待測蘋果總RNA的特定轉錄本中第225個密碼子的核苷酸序列；所述特定轉錄本為蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因轉錄得到的RNA，其第1個密碼子為起始密碼子；

“特定轉錄本中第225個密碼子的核苷酸序列僅編碼脯氨酸”的待測蘋果的果實硬度高于“特定轉錄本中第225個密碼子的核苷酸序列編碼脯氨酸和丙氨酸”的待測蘋果；

所述蘋果轉錄因子ERF4自N端至C端依次由區段Ⅰ、區段Ⅱ和區段Ⅲ組成；

所述區段Ⅰ為氨基酸序列是序列表中序列3自N末端起第1至224位所示的多肽；

所述區段Ⅱ為脯氨酸殘基或丙氨酸殘基；

所述區段Ⅲ自N端至C端依次為PSEV；

所述待測蘋果為紅富士、紫塞明珠和/或紅富士和紫塞明珠的雜交后代。

3.一種預測待測蘋果果實硬度的方法，包括如下步驟：檢測待測蘋果總DNA中蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因自5’末端起第673位的核苷酸種類；

“蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因自5’末端起第673位的核苷酸種類僅為C”的待測蘋果的果實硬度高于“蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因自5’末端起第673位的核苷酸種類為C和G”的待測蘋果；

所述蘋果轉錄因子ERF4的編碼基因為如下x1）或x2）：

x1）其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；

x2）其核苷酸序列是序列表中序列2所示的DNA分子；

所述待測蘋果為紅富士、紫塞明珠和/或紅富士和紫塞明珠的雜交后代。

4.一種預測待測蘋果果實硬度的方法，包括如下步驟：提取待測蘋果的總RNA并反轉錄為cDNA，然后采用特異引物對進行PCR擴增，檢測PCR擴增產物；

“PCR擴增產物中具有序列表的序列1所示的DNA分子且不具有序列表的序列2所示的DNA分子”的待測蘋果的果實硬度高于“PCR擴增產物中具有序列表的序列1所示的DNA分子且具有序列表的序列2所示的DNA分子”的待測蘋果；

所述特異引物對由用于擴增特異DNA片段的兩條引物組成；所述特異DNA片段中具有蘋果基因組中引物F1和引物R1組成的引物對的靶序列；

所述引物F1為序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

所述引物R1為序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

所述待測蘋果為紅富士、紫塞明珠和/或紅富士和紫塞明珠的雜交后代。

5.一種預測待測蘋果果實硬度的方法，包括如下步驟：檢測待測蘋果總DNA中是否具有序列表的序列1所示的DNA分子和序列表的序列2所示的DNA分子；

“待測蘋果總DNA中具有序列表的序列1所示的DNA分子且不具有序列表的序列2所示的DNA分子”的待測蘋果的果實硬度高于“待測蘋果總DNA中具有序列表的序列1所示的DNA分子且具有序列表的序列2所示的DNA分子”的待測蘋果；

所述待測蘋果為紅富士、紫塞明珠和/或紅富士和紫塞明珠的雜交后代。

6.權利要求1至5任一所述的方法，其特征在于：所述果實硬度為果皮硬度和/或果肉硬度。