[發明專利]一種單通道熒光成像檢測活性癌細胞中微量Ca2+

有效

• 申請號: 201810358113.7
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108548804B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 曾晞;廖賢;方浚安;許萬里;田雁;牟蘭
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防;張梅

本發明公開一種單通道熒光成像檢測活性癌細胞中微量Ca²⁺、Sr²⁺和Ba²⁺的方法，是以經典杯[4]芳烴衍生物作為探針，通過單通道熒光成像分別檢測活性癌細胞中微量Ca2+、Sr2+和Ba2+；本發明方法能實現對多目標離子的檢測，本發明中的探針與Ca²⁺、Sr²⁺和Ba²⁺在細胞內分別形成探針?Ca²⁺、探針?Sr²⁺、探針?Ba²⁺配合物，發射不同波長強烈熒光，檢測方便，可視性好，靈敏度高、選擇性好，能實現實時在線檢測細胞內Ca²⁺、Sr²⁺和Ba²⁺。

技術領域

本發明涉及一種單通道熒光成像檢測活細胞中微量離子的方法，特別是一種單通道熒光成像檢測活性癌細胞中微量Ca²⁺、Sr²⁺和Ba²⁺的方法。

背景技術

在細胞生物學和醫學研究中，熒光探針因其高空間分辨能力和最小限度擾動活體的特征，能夠允許研究者實時監測到發生于活細胞及生物活體中的事件，作為最強有力的工具之一，被越來越重視和使用。探針作為研究金屬離子傳輸載體以及在藥物傳輸系統中細胞膜的跨越行為尤為重要。熒光成像檢測細胞內離子能夠提供生命體系中離子的時空分布最直接的信息，由于它的無創性、高靈敏、高選擇等特征，在生物體系中是追蹤金屬離子最可靠的技術之一。

鈣、鍶、鋇均為周期表中IIA族堿土金屬，是地殼中含量較多的元素，它們在生物學的功能中有著同樣重要作用，參與各種生理功能和代謝過程，影響器官組織的活動。其中，鈣是人體中含量最豐富且必須的營養元素，也是人體中最常見的一種礦物質離子。鈣對身體中骨骼和對軟組織發育過程中如骨鹽沉積、血凝固、肌肉收縮、神經刺激管理和細胞生長及變異都及其重要。反常高或低的血漿水平中的鈣被認為是高或低鈣血癥。鈣信號的異常會導致神經退行性變，心臟病，骨骼肌缺陷以及中樞神經紊亂等。因此，檢測細胞及血漿中微量鈣是非常必要的。雖然，鍶在生理學中的相關性不如Ca²⁺那樣密切，但由于存在于某些合金、染料及鐵氧磁體和熒光燈中等商業用途，特別是具有放射性的 Sr²⁺的高靈敏和快速及實時檢測能夠有助環境安全及決策。鋇及其化合物用途甚廣，常見鋇鹽有硫酸鋇、碳酸鋇、氯化鋇硫化鋇、硝酸鋇、氧化鋇等，除硫酸鋇外，其他鋇鹽均有毒性，存在著鋇中毒的可能。鋇廣泛用于顏料、玻璃及煙花制品等許多行業，為其進入環境提供了途徑。Ba²⁺在生物系統中同樣起著重要作用。人體中Ba²⁺水平增高會導致急性胃腸炎，肌肉麻痹，呼吸衰竭等。因此，對于鈣、鍶、鋇離子的檢測十分重要

作為細胞成像檢測微量金屬離子的探針已有很多報道，但大多是單探針對單一目標離子檢測，存在檢測不方便，選擇性差，不能實現單一探針對細胞中多目標離子的高效檢測等問題。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種單通道熒光成像檢測活性癌細胞中微量Ca²⁺、 Sr²⁺和Ba²⁺的方法，本發明方法能實現對多目標離子的檢測，本發明中的探針與 Ca²⁺、Sr²⁺和Ba²⁺在細胞內分別形成探針-Ca²⁺、探針-Sr²⁺、探針-Ba²⁺配合物，使探針原本的熒光猝滅，檢測方便，可視性好，靈敏度高、選擇性好，能實現實時在線檢測細胞內Ca²⁺、Sr²⁺和Ba²⁺。