[發明專利]用于癌癥樣本miRNA測序定量結果評價的試劑、制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810356012.6
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108707663B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 宗亮;丁芬;姚秋林;田志堅;唐美芳
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;彭家恩

本申請公開了一種用于癌癥樣本miRNA測序定量結果評價的試劑及其制備方法和應用。本申請的試劑包括SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.8所示序列的RNA中的至少一種。本申請的試劑，將其定量的加入待測RNA樣品中，并通過測序定量分析所加入的試劑的量，將定量分析結果與實際加入量進行比較，以此評價整個miRNA測序定量結果的準確性和可靠性；該方法簡便、易用，能夠有效的評價miRNA測序定量結果的可信度。本申請的試劑各方面特性都與真實的miRNA十分接近，因此，采用本申請的試劑能夠更真實、準確、可靠的反映人源miRNA測序定量結果的實際情況，從而對癌癥樣本miRNA測序定量結果作出更準確、可靠的評價。

技術領域

本申請涉及miRNA測序定量檢測領域，特別是涉及一種用于癌癥樣本miRNA測序定量結果評價的試劑及其制備方法應用。

背景技術

Small RNA是生物體內一類重要的功能分子，通過各種序列特異性的基因沉默作用，調控諸如細胞生長發育、應激反應、沉默轉座子等各種各樣的細胞生理過程。

Small RNA測序則是借助新一代高通量測序技術，對某物種某組織在特定狀態下的18-30nt的small RNA進行高通量測序。繼而通過數據庫比對，對獲得的small RNA序列進行分析、鑒定，將數百萬條small RNA序列分類成rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA和miRNA等。

成熟的miRNA通過翻譯抑制或增強mRNA降解來調控基因表達。許多miRNA都位于不同類型癌癥中刪除或擴增的基因組區域，在大部分癌癥類型中都觀察到miRNA表達水平的整體下降。癌癥研究中miRNA的研究大致可分為兩大類：第一類是發現癌癥發展中起作用的miRNA并注釋功能；第二類是miRNA作為癌癥檢測和分期標志物的潛在應用研究，以此改善癌癥的診斷和治療。

容易測定、相對穩定、對mRNA具有調控作用，這些特點讓miRNA有潛力成為癌癥的標志物，但任何新發現的候選miRNA想要成為合格的生物標志物，都還有很長的路要走。迄今為止，miRNA作為生物標志物的研究仍處于生物標志物發現的極早期階段，因此，評價miRNA測序數據的真實性和準確性就顯得尤為重要。

隨著高通量測序技術的普及和發展，small RNA文庫的制備和測序已成為常規實驗方法。但值得注意的是，其定量結果的可靠性一直廣受質疑。從獲得生物學樣本到RNA的提取、建庫和測序，miRNA經歷了復雜的處理過程，這些處理過程都有可能為最終的測序結果引入相應偏差，直接影響分析結果的準確性。

2014年，Pieter Mestdagh等研究人員曾撰文討論，認為miRNA測序結果可重復性較差，且不同的建庫方法有可能導致分析結果出現顯著差異。因此，亟需引入一種實驗方法對miRNA測序結果進行客觀評估，從而指導實驗人員確認分析結果的準確性和可靠性。

現階段，沒有任何成熟的技術對miRNA測序結果給出快速、客觀的評價。在癌癥相關研究中，一般要求實驗應當包含足夠數量的樣品，以建立統計學可信度；即通過測序分析獲得差異表達的miRNA后，通常需要大量患者樣本來檢驗此結果，以此建立統計學可信度。現有的評估方案在應用中存在多種局限。無法對測序數據提供實時的評價，且需要耗費大量實驗資源和時間。目前對于在測序研究中建立統計學可信度和多重檢驗糾正，還沒有公認的方法。

發明內容

本申請的目的是提供一種新的用于癌癥樣本miRNA測序定量結果評價的試劑，該試劑的制備方法，以及該試劑的應用。

本申請具體采用了以下技術方案：

本申請一方面公開了一種用于癌癥樣本miRNA測序定量結果評價的試劑，該試劑包括SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.8所示序列的RNA中的至少一種；

SEQ ID NO.1：5’-GAGCCAUGCAUUAUAUGCCAG-3’