[發明專利]一種獺兔皮膚真皮毛乳頭細胞分離培養方法在審
| 申請號： | 201810355965.0 | 申請日： | 2018-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN108359633A | 公開（公告）日： | 2018-08-03 |
| 發明（設計）人： | 李福昌;劉公言;吳振宇;李凡;劉磊 | 申請（專利權）人： | 山東農業大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 濟南千慧專利事務所(普通合伙企業) 37232 | 代理人： | 商福全 |
| 地址： | 271018 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 分離培養 獺兔 皮膚 消化 乳頭細胞 真皮毛 去除 細胞生物學技術 細胞培養基 背部皮膚 表皮處理 分離過程 機械損傷 皮膚真皮 胎牛血清 乳頭 分離酶 膠原酶 培養箱 上清液 無細胞 表皮 剪碎 重懸 顯微鏡 成功率 游離 細胞 觀察 | ||
1.一種獺兔皮膚真皮毛乳頭細胞分離培養方法，其特征在于：包括如下操作步驟:
(1)取獺兔背部皮膚，剪成長條，置于Ⅱ型分離酶溶液中，于4℃過夜消化，次日于37℃培養箱中消化后，去除表皮；
(2)將經步驟(1)去除表皮處理后剩余的皮膚真皮部分剪碎成泥，置于D型膠原酶中消化4-6h，至消化皮膚呈液態并在顯微鏡下觀察有毛乳頭游離出，用含胎牛血清的DMEM終止消化；
(3)將經步驟(2)處理后的液態皮膚離心，收集細胞，棄去上清液，細胞培養基重懸，即得。
2.根據權利要求1所述的一種獺兔皮膚真皮毛乳頭細胞分離培養方法，其特征在于：步驟(2)所述消化溫度為37℃，消化時間為4-6h。
3.根據權利要求1所述的一種獺兔皮膚真皮毛乳頭細胞分離培養方法，其特征在于：步驟(3)所述離心的具體操作步驟依次為：2000r/min離心4-6min，重復2次；500r/min離心2-4min，重復4次；2000r/min離心3-7min，重復2次；500r/min離心2-4min，重復4次。
4.根據權利要求3所述的一種獺兔皮膚真皮毛乳頭細胞分離培養方法，其特征在于：步驟(3)所述離心的具體操作步驟依次為：2000r/min離心5min，重復2次；500r/min離心3min，重復4次；2000r/min離心5min，重復2次；500r/min離心3min，重復4次。
5.根據權利要求1所述的一種獺兔皮膚真皮毛乳頭細胞分離培養方法，其特征在于：步驟(1)所述獺兔背部皮膚為25-35日齡獺兔背部皮膚。
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