[發明專利]包含家蠅抗菌肽基因的重組載體、菌株及其表達和應用在審
| 申請號： | 201810355337.2 | 申請日： | 2018-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN108315345A | 公開（公告）日： | 2018-07-24 |
| 發明（設計）人： | 徐楠;吳建偉;彭建 | 申請（專利權）人： | 貴州博康生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N1/19;C07K14/435;C12P21/00;A23K10/18;A23K20/147;A23K50/75;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙) 11362 | 代理人： | 郭防 |
| 地址： | 550081 貴州省貴陽市*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 家蠅抗菌肽 重組酵母菌株 重組載體 家禽飼料添加劑 表達產物 家蠅抗菌肽基因 應用 重組酵母菌 發酵水平 滅活菌體 念珠菌病 生產效率 基因 菌株 發酵 家禽 防治 | ||
1.一種包含家蠅抗菌肽MAF-1基因的重組載體，其特征在于，所述載體是畢赤酵母表達載體。
2.根據權利要求1所述的包含家蠅抗菌肽MAF-1基因的重組載體，其特征在于，所述重組載體的制作方法如下：
(1)將編碼家蠅抗菌肽MAF-1的基因插入質粒pPink-HC上的CYC1和ADE2限制性酶切位點之間，得到穿梭質粒pPink-HC-MAF-1；
(2)將穿梭質粒pPink-HC-MAF-1電穿孔轉入畢赤酵母野生型P1酵母菌，使穿梭質粒pPink-HC-MAF-1的ADE2基因插入酵母表達載體pPICZaA中的ADE2缺陷位點并與酵母表達載體pPICZaA連接，即得重組酵母表達載體。
3.一種含有權利要求1或2所述的包含家蠅抗菌肽MAF-1基因的重組載體的重組酵母菌株。
4.根據權利要求3所述的包含家蠅抗菌肽MAF-1基因的重組載體的重組酵母菌株，其特征在于，重組菌株是畢赤酵母野生型P1菌株。
5.一種表達家蠅抗菌肽MAF-1的方法，其特征在于，包含如下步驟：
(1)權利要求3或4所述的重組酵母菌株在搖瓶或發酵罐中進行發酵，誘導重組酵母菌株表達家蠅抗菌肽MAF-1；
(2)發酵結束后，將重組酵母回收破碎離心后取上清，回收并純化所表達的抗菌肽MAF-1。
6.根據權利要求5所述的表達家蠅抗菌肽MAF-1的方法，其特征在于：所述發酵誘導重組酵母菌株表達家蠅抗菌肽MAF-1的條件為30％～50％甲醇，30～32℃，攪拌速率250～350rmp，發酵時間為24～72小時。
7.權利要求3或4所述的重組酵母菌株在家禽飼料添加劑中的應用，其特征在于：采用權利要求5步驟(1)中所述發酵誘導表達后的重組酵母菌制成干燥滅活菌體作為所述家禽飼料添加劑的活性成分。
8.根據權利要求5所述的表達家蠅抗菌肽MAF-1的方法所獲得的家蠅抗菌肽MAF-1在家禽飼料添加劑中的應用。
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