[發明專利]一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法

在審

• 申請號: 201810354600.6
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108426957A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 張佳瑜;馬嘉琦;余曉娟;劉靜;雷建都
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法。包括以下步驟：(1)利用亞臨界水綜合提取山楂葉中的活性成分；(2)色譜條件的建立與系統適應性步驟；(3)標準品溶液的配置和標準曲線的繪制；(4)測定步驟；(5)方法學的驗證。本發明是在同一色譜條件下實現了一測多評的定量分析，節約了成本、人力、物力，使實驗方法的操作更加簡單快捷。

技術領域

本發明涉及醫藥產品生產制造技術領域，尤其涉及一種采用一測多評法測定山楂葉藥材中三萜類和黃酮類成分的方法。

背景技術

山楂葉中含有大量的黃酮類物質和一些維生素C還有一些胡蘿卜素，這些物質進入體以后會減少人體內自由基的生成，能延緩人體多種衰老癥狀的發生，同是也能防癌抗癌，降低人類癌癥的發生機率。山楂葉入藥以后可以保護人類的心腦血管，它能清理血液中的膽固醇，也能擴張血管，加快血液流動速度，還能改善心臟活力，平時可以用于人類高血壓和高血脂以及動脈硬化等多種心腦血管類疾病的預防和治療。另外山楂葉還能入肺經，可以止咳平喘，也能化痰，對人類的氣管炎以及哮喘和咳嗽痰多等癥狀都有很好的調理作用。

山楂葉中主要功效成分是總黃酮，包括槲皮素、金絲桃苷、牡荊素、牡荊素鼠李糖苷、熊果酸、蘆丁等。由于某些化學對照品分離難度大，或單體不穩定難以分離難以供應、供應價格高等造成了成分多指標質量控制對照品的匱乏問題，限制了用常規內標法和外標法來實現多成分的定量和多指標的質量控制。一測多評法在于利用成分內在的函數關系和比例關系，只測定一種成分，能夠實現對多種成分的同步測控。

發明內容

本發明采用一測多評法同時測定山楂葉中的多種有效成分，同時通過建立標準品的標準曲線，采用外標法對結果進行了相互驗證。包括以下步驟：

(1)標準品溶液的制備：

稱取牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的標準品，加甲醇制成標準品溶液，使每1mL標準溶液分別含有0.8mg/mL的牡荊素、0.8mg/mL金絲桃苷、0.2mg/mL槲皮素；再取上述標準品溶液各5.00mL混合搖勻，作為混合標準品溶液。

(2)混合標準品溶液的測定：

配制系列濃度的混合標準品溶液，采用高效液相色譜儀進行分析，測定各色譜峰的峰面積，得到牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的標準曲線。

色譜條件如下：

檢測波長：365nm±5nm

參考波長：280nm±5nm

色譜柱：C18色譜柱

流動相：甲醇、0.5％乙酸

(3)供試品溶液的制備：

取干燥粉碎的樣品，加甲醇用亞臨界水法提取，離心分離得供試樣品溶液。稱取過40目篩的山楂葉粉末1.000g，置于50mL錐形瓶中，加入25mL蒸餾水，搖勻，置于高壓反應釜中。在馬弗爐中高溫處理30min后，取樣品進行離心分離，取離心溶液下層沉淀物，再加入25mL甲醇溶液溶解并均勻攪拌，再次進行離心分離，取上層清液為供試品溶液。

(4)測定：

取10mL供試品溶液過0.45uL的有機濾膜后置于液相瓶中，精密10μL，注入液相色譜儀，采用內標法計算，供試品溶液的特征圖譜中呈現牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的峰值，通過與金絲桃苷的相對校正因子計算荊素、金絲桃苷、槲皮素的含量。