[發明專利]一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法

在審

• 申請號: 201810354600.6
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108426957A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 張佳瑜;馬嘉琦;余曉娟;劉靜;雷建都
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)標準品溶液的制備：

稱取牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的標準品，加甲醇制成標準品溶液，使每1mL標準溶液分別含有0.8mg/mL的牡荊素、0.8mg/mL金絲桃苷、0.2mg/mL槲皮素；再取上述標準品溶液各5.00mL混合搖勻，作為混合標準品溶液；

(2)混合標準品溶液的測定：

配制系列濃度的混合標準品溶液，采用高效液相色譜儀進行分析，測定各色譜峰的峰面積，得到牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的標準曲線；

色譜條件如下：

檢測波長：365nm±5nm

參考波長：280nm±5nm

色譜柱：C18色譜柱

流動相：甲醇、0.5％乙酸

(3)供試品溶液的制備：

取干燥粉碎的樣品，加甲醇用亞臨界水法提取，離心分離得供試樣品溶液。稱取過40目篩的山楂葉粉末1.000g，置于50mL錐形瓶中，加入25mL蒸餾水，搖勻。將其置于高壓反應釜中，在馬弗爐中高溫處理30min。取高溫處理后的樣品進行離心分離，取離心溶液下層沉淀物，再加入25mL甲醇溶液溶解并均勻攪拌，再次進行離心分離，取上層清液為供試品溶液；

(4)測定：

取10mL供試品溶液過0.45uL的有機濾膜后置于液相瓶中，精密10μL，注入液相色譜儀，采用內標法計算，供試品溶液的特征圖譜中呈現牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的峰值，通過與金絲桃苷的相對校正因子計算荊素、金絲桃苷、槲皮素的含量。

2.根據權利要求1中所述的一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法，其特征在于：步驟(2)中的C18色譜柱為Agilent Eclipse Plus C18色譜柱、Waters Bridge C18色譜柱或Agilent Eclipse Plus C18色譜柱；色譜柱的規格為250mm×4.6mm，5μm；高效液相色譜儀為Agilent 1260、島津LC-2010A或Waters e2695；柱溫為20～30℃，優選30℃；流速為0.6～1.0mL·min^-1，優選0.6mL·min^-1。

3.根據權利要求1所述的一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法，其特征在于：步驟(3)中的亞臨界水法提取條件為130～150℃，優選135℃。

4.根據權利要求1所述的一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法，其特征在于：步驟(4)中的相對校正因子是通過下述步驟得到的：取牡荊素、金絲桃苷、槲皮素，加甲醇配制成混合標準品溶液；取混合標準品溶液，采用高效液相色譜儀進行分析，以步驟(2)相同的色譜條件檢測，得到牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的標準曲線；

以金絲桃苷為內參物，根據相對校正因子f計算公式：

計算牡荊素、金絲桃苷、槲皮素的相對校正因子分別如下：1.001、1.0001、4.053。

5.權利要求1-4任意一項所述的一種采用一測多評法檢測山楂葉提取物中多種有效成分含量的方法，用于山楂葉及其產品中多種有效成分的含量檢測。