[發(fā)明專利]嗜熱子囊菌基因表達(dá)系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810354443.9
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108949579B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 洪泂;胡圣霖;王冬梅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/15;C12N15/80;C12R1/645
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 高麗娜

1.一種嗜熱子囊菌乳清酸核苷-5’-磷酸脫羧酶基因(pyrG)缺陷型菌株，其保藏號為CGMCC.13375。

2.一種嗜熱子囊菌基因表達(dá)系統(tǒng)，所述表達(dá)系統(tǒng)包含權(quán)利要求1的菌株作為宿主菌。

3.權(quán)利要求2的表達(dá)系統(tǒng)，所述表達(dá)系統(tǒng)還包含用于轉(zhuǎn)化所述宿主菌的載有目的基因的載體。

4.權(quán)利要求3的表達(dá)系統(tǒng)，其中所述載體是質(zhì)粒。

5.權(quán)利要求3或4的表達(dá)系統(tǒng)，其中所述載體包含與權(quán)利要求1的pyrG缺陷型菌株對應(yīng)的pyrG基因作為轉(zhuǎn)化的選擇標(biāo)簽。

6.權(quán)利要求5的表達(dá)系統(tǒng)，其中所述pyrG基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

7.權(quán)利要求3的表達(dá)系統(tǒng)，其中所述載體在所述目的基因上游還包含啟動子，所述啟動子為纖維二糖水解酶(CBH)或內(nèi)切葡萄糖苷酶(EG)的啟動子。

8.權(quán)利要求7的表達(dá)系統(tǒng)，其中CBH啟動子的核酸序列如SEQ IDNO.3所示，EG啟動子的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

9.一種分離的核酸，所述核酸編碼嗜熱子囊菌乳清酸核苷-5’-磷酸脫羧酶，所述核酸的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

10.一種用載有目的基因的外源核酸載體轉(zhuǎn)化權(quán)利要求1的菌株的方法，所述方法包括以下步驟：

用蝸牛酶處理所述菌株的菌絲以制備具有再生活力的原生質(zhì)體；

向獲得的原生質(zhì)體加入所述外源核酸載體并孵育；以及

在加入所述外源核酸載體并孵育后，加入PEG溶液并孵育。

11.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述PEG溶液是PEG4000溶液。

12.一種利用權(quán)利要求1的菌株作為宿主菌表達(dá)目的基因的方法，所述方法包括：

通過權(quán)利要求10或11的方法將目的基因轉(zhuǎn)化到所述宿主菌中；以及

對轉(zhuǎn)化到所述宿主菌中的所述目的基因進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。