[發(fā)明專利]一種降低-80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810348839.2
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN108522495A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設計）人: 沈兵
• 申請（專利權）人: 沈兵
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 趙超

本發(fā)明公開了一種降低?80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)蔓荊子二萜C、D、E或山藿香定可以通過抑制CIK細胞中hsa?miR?543的表達水平提高其在?80℃凍存6月后對腫瘤細胞的殺傷力，凍存前經(jīng)蔓荊子二萜C、D、E或山藿香定預處理可以將其于?80℃凍存6月后對腫瘤細胞的殺傷力維持在凍存前的水平。因此，本發(fā)明提供的方法可以有效降低?80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的不利影響。

技術領域

本發(fā)明屬于細胞免疫領域，涉及一種降低-80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法。

背景技術

-80℃凍存常用于對CIK細胞進行6個月內的短期保存。研究表明，-80℃凍存3個月可以基本保持CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性，但是從第4個月開始，復蘇后的CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力顯著降低(參考文獻：不同凍存時間對CIK細胞免疫表型及殺傷活性的影響，現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2016年05月第24卷第10期)。

上述缺陷影響了-80℃凍存對CIK細胞6個月短期保存的效果。

發(fā)明內容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術不足，提供降低-80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法。

本發(fā)明技術方案如下：

一種降低-80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法，凍存前先用hsa-miR-543抑制劑預處理，所述hsa-miR-543抑制劑為蔓荊子二萜C。

一種-80℃凍存CIK細胞的方法：取培養(yǎng)中的CIK細胞，于凍存前一定時間在培養(yǎng)基中添加有效濃度的hsa-miR-543抑制劑蔓荊子二萜C，培養(yǎng)一定時間后，離心棄上清液，加入凍存液，調整細胞濃度至合適濃度，梯度降溫至-80℃凍存。

優(yōu)選地，于凍存前8h在培養(yǎng)基中添加有效濃度的hsa-miR-543抑制劑蔓荊子二萜C，培養(yǎng)8h后，離心棄上清液。

優(yōu)選地，蔓荊子二萜C濃度為10μM。

優(yōu)選地，凍存液由RPMI 1640培養(yǎng)基、自體血漿和二甲基亞砜按體積比5:4:1混合而成。

優(yōu)選地，調整細胞濃度至2×10⁷/ml。

優(yōu)選地，梯度降溫方法為：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，轉至-80℃低溫冰箱放置。

一種降低-80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法，凍存前先用hsa-miR-543抑制劑預處理，所述hsa-miR-543抑制劑為蔓荊子二萜D或蔓荊子二萜E。

一種-80℃凍存CIK細胞的方法：取培養(yǎng)中的CIK細胞，于凍存前一定時間在培養(yǎng)基中添加有效濃度的hsa-miR-543抑制劑蔓荊子二萜D或蔓荊子二萜E，培養(yǎng)一定時間后，離心棄上清液，加入凍存液，調整細胞濃度至合適濃度，梯度降溫至-80℃凍存。

優(yōu)選地，于凍存前8h在培養(yǎng)基中添加有效濃度的hsa-miR-543抑制劑蔓荊子二萜D或蔓荊子二萜E，培養(yǎng)8h后，離心棄上清液。

優(yōu)選地，蔓荊子二萜D或蔓荊子二萜E濃度為10μM。

優(yōu)選地，凍存液由RPMI 1640培養(yǎng)基、自體血漿和二甲基亞砜按體積比5:4:1混合而成。

優(yōu)選地，調整細胞濃度至2×10⁷/ml。

優(yōu)選地，梯度降溫方法為：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，轉至-80℃低溫冰箱放置。

一種降低-80℃凍存對CIK細胞殺傷腫瘤活性的方法，凍存前先用hsa-miR-543抑制劑預處理，所述hsa-miR-543抑制劑為山藿香定。