[發(fā)明專利]一種降低-80℃凍存對CIK細(xì)胞殺傷腫瘤活性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810348839.2
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN108522495A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈兵
• 申請（專利權(quán)）人: 沈兵
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 趙超

1.一種降低-80℃凍存對CIK細(xì)胞殺傷腫瘤活性的方法，凍存前先用hsa-miR-543抑制劑預(yù)處理，所述hsa-miR-543抑制劑為山藿香定。

2.一種-80℃凍存CIK細(xì)胞的方法，其特征在于：取培養(yǎng)中的CIK細(xì)胞，于凍存前一定時(shí)間在培養(yǎng)基中添加有效濃度的hsa-miR-543抑制劑山藿香定，培養(yǎng)一定時(shí)間后，離心棄上清液，加入凍存液，調(diào)整細(xì)胞濃度至合適濃度，梯度降溫至-80℃凍存。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：于凍存前8h在培養(yǎng)基中添加有效濃度的hsa-miR-543抑制劑山藿香定，培養(yǎng)8h后，離心棄上清液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于：山藿香定濃度為10μM。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：凍存液由RPMI 1640培養(yǎng)基、自體血漿和二甲基亞砜按照體積比5:4:1混合而成。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：調(diào)整細(xì)胞濃度至2×10⁷/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，梯度降溫方法為：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，轉(zhuǎn)至-80℃低溫冰箱放置。