[發(fā)明專利]一種高靈敏的突變位點(diǎn)檢測(cè)體系、方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810347109.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108642153B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉兆成;趙國(guó)棟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州唯善生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6858
• 分類號(hào): C12Q1/6858
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 薛海霞;董建林

1.一種高靈敏的基因突變檢測(cè)體系，其特征在于，包括：

針對(duì)野生型基因的野生型引物、針對(duì)突變型基因的突變型引物、通用引物、突變型blocker引物、野生型blocker引物和通用型探針；野生型引物為野生型上游引物或野生型下游引物；突變型引物為突變型上游引物或突變型下游引物；通用引物為通用上游引物或通用下游引物；

所述的基因突變檢測(cè)體系為雙管PCR體系，其中一管包括野生型引物、突變型blocker引物和通用引物，另一管包括突變型引物、野生型blocker引物和通用引物；

所述野生型引物和野生型模板互補(bǔ)，所述突變型引物和突變型模板互補(bǔ)；所述野生型引物和突變型引物的3’端的末端堿基不同或在引物序列中間的一個(gè)堿基不同，其它序列相同；所述野生型引物和突變型引物的長(zhǎng)度為15-35個(gè)堿基；

所述通用引物分別和所述野生型模板、突變型模板均互補(bǔ)，其長(zhǎng)度為15-35個(gè)堿基；

所述野生型blocker引物和野生型模板互補(bǔ)，所述突變型blocker引物和突變型模板互補(bǔ)；所述野生型blocker引物和突變型blocker引物的5’端的末端堿基不同或由5’端到引物序列中間所組成的序列片段的一個(gè)堿基不同，而其它序列相同；所述野生型blocker引物和突變型blocker引物的長(zhǎng)度為15-40個(gè)堿基；所述野生型blocker引物和突變型blocker引物不可以發(fā)生擴(kuò)增，所述野生型blocker引物和突變型blocker引物的3’端被修飾基團(tuán)修飾或3’端有若干個(gè)和所述野生型模板、突變型模板均不互補(bǔ)的堿基；

所述的通用上游引物選自：

5’-ACCAGTTGGGCATGTTGA-3’ SEQ ID NO：1；

5’-AGCATTGGAATCCAGAAACCAG-3’ SEQ ID NO：2；

5’-GAATCCAGAAACCAGTTGGGC-3’ SEQ ID NO：3；

5’-TCTCCCTCCCTCCAGGAAGC-3’ SEQ ID NO：4；

5’-GACCGTCGCTTGGTGCA-3’ SEQ ID NO：5；

5’-TACTTGGAGGACCGTCGCT-3’ SEQ ID NO：6；

5’-AGGGCATGAACTACTTGG-3’ SEQ ID NO：7；

野生型下游引物選自：

5’-CAAGTCCTCTCTCTGCAATC-3’ SEQ ID NO：8；

5’-CCAAGTCCTCTCTCTGCAATC-3’ SEQ ID NO：9；

5’-GCA CCC AGC AGT TTG GCCG-3’ SEQ ID NO：10；

5’-CGA AGG GCA TGA GCT GCG-3’ SEQ ID NO：11；

突變型blocker引物選自：

5’-CACGCGGATAGCTTCTCCAATGTTACATC-3’ SEQ ID NO：12；

5’-CACGCGGATAGCTTCTCCAATGTTAC-3’ SEQ ID NO：13；

5’-CACGCGGATAGCTTCTCCAATGTTACATCCTG-3’ SEQ ID NO：14；

5’-ATG ATG AGC TGC ACG GTG GAG GTG AGG CAG-3’ SEQ ID NO：15；每一個(gè)突變型blocker引物的3’端采用磷酸化修飾；

突變型下游引物選自：

5’-CCAAGTCCTCTCTCTGCAATG-3’ SEQ ID NO：16；

5’-CAAGTCCTCTCTCTGCAATC-3’ SEQ ID NO：17；

5’-GCA CCC AGC AGT TTG GCCG-3’ SEQ ID NO：18；

5’-CGA AGG GCA TGA GCT GCA-3’ SEQ ID NO：19；

野生型blocker引物選自：

5’-CACGCGGATAGCTTCTCCAATGTTACATCCTG-3’ SEQ ID NO：20；

5’-CACGCGGATAGCTTCTCCAATGTTACATC-3’ SEQ ID NO：21；

5’-CACGCGGATAGCTTCTCCAATGTTACATCCTG-3’ SEQ ID NO：22；

5’-AGC CCA AAA TCT GTG ATC TTG ACA TGC TGC G-3’ SEQ ID NO：23；

5’-AGC CCA AAA TCT GTG ATC TTG ACA TGC T-3’ SEQ ID NO：24；

5’-GTG ATG AGC TGC ACG GTG GAG GTG AGG CAG-3’ SEQ ID NO：25；每一個(gè)野生型blocker引物3’端采用磷酸化修飾；

通用型探針選自：

5’-CTGAAAAGTACCTCCATTCGGGT-3’ SEQ ID NO：26；

5’-TTGCTGAAAAGTACCTCCATTCGG-3’ SEQ ID NO：27；

5’-TTTCAC CAG TAC GTT CCT GGC TGC-3’ SEQ ID NO：28；

5’-CAC CAG TAC GTT CCT GGC TGC CA-3’ SEQ ID NO：29；

5’-CAC GTG GGG GTT GTC CAC GCT G-3’ SEQ ID NO：30；

野生型模板選自：

5’-ACCAGTTGGGCATGTTGACATTTACCCGAATGGAGGTACTTTTCAGCCAGGATGTAACATTGGAGAAGCTATCCGCGTCATTGCAGAGAGAGGACTTGG-3’ SEQ ID NO：31；

5’-ATGACCCTGAATTCGGATGCAGAGCTTCTTCCCATGATGATCTGTCCCTCACAGCAGGGTCTTCTCTGTTTCAGGGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTACTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAAGTAAGGAGGTGGCTTTAGGTCAGCCAGCATTTTCCTGACACCAGGGACCAGGCTGCCTTCCCACTAGCT-3’ SEQ ID NO：32；

5’-CTTCACCTGGAAGGGGTCCATGTGCCCCTCCTTCTGGCCACCATGCGAAGCCACACTGACGTGCCTCTCCCTCCCTCCAGGAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCACGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTATGTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCA-3’ SEQ ID NO：33；

突變型模板選自：

5’-ACCAGTTGGGCATGTTGACATTTACCCGAATGGAGGTACTTTTCAGCCAGGATGTAACATTGGAGAAGCTATCCGCGTGATTGCAGAGAGAGGACTTGG-3’ SEQ ID NO：34；

5’-ATGACCCTGAATTCGGATGCAGAGCTTCTTCCCATGATGATCTGTCCCTCACAGCAGGGTCTTCTCTGTTTCAGGGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTACTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAAGTAAGGAGGTGGCTTTAGGTCAGCCAGCATTTTCCTGACACCAGGGACCAGGCTGCCTTCCCACTAGCT-3’ SEQ ID NO：35；

5’-CTTCACCTGGAAGGGGTCCATGTGCCCCTCCTTCTGGCCACCATGCGAAGCCACACTGACGTGCCTCTCCCTCCCTCCAGGAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCATGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTATGTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCA-3’ SEQ ID NO：36。