[發(fā)明專利]一種人類精液超快速冷凍保存體系

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810346285.2
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN108651440A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設計）人: 范立青;周戴;王行明;曾亞榮;孛昊
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種適用于人類精子的超快速冷凍保存體系，包括冷凍保護劑、冷凍方法和解凍方法，本發(fā)明提供的冷凍保存體系，適用于未處理的人類精液和經過優(yōu)選后的人類精液，以及微量人類精液的冷凍，使用本發(fā)明所述的冷凍保護劑與人類精液充分混合后，采用本發(fā)明提供的冷凍方法進行冷凍保存，并且采用本發(fā)明提供的解凍方法復蘇后，可以獲得與普通冷凍方法更好的冷凍復蘇率、精子活力和前向運動精子總數。具有適用范圍廣，操作簡便和操作時間短的優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明涉及細胞的凍存領域，尤其是人類精液保存技術領域，屬于生物技術領域，具體為一種人類精液超快速冷凍保存體系。

背景技術

輔助生殖技術的進步，為發(fā)生率為10％-15％的不孕癥患者提供了能夠擁有健康后代的希望。在輔助生殖中，人類精液的保存是最為基本的常規(guī)操作技術之一，精液冷凍技術的不斷提升，意味著可以應用于臨床使用的精子數量和質量的提高，有利于優(yōu)生優(yōu)育，人類精液的冷凍保存是男性不育癥治療的有效操作之一。另一方面，近年來，伴隨著男性的生育年齡推后、環(huán)境影響等原因，男性精液質量持續(xù)下降，人類精液的冷凍保存為男性生育力的保存提供了強有力的保障。目前衡量人類精液冷凍質量的主要指標為精子冷凍復蘇率，影響精子冷凍復蘇率的主要因素分為精液自身因素和非自身因素，非自身因素主要包括實驗室因素(包括冷凍保護劑、冷凍方法、冷凍載體、復蘇方法等)和其他因素(季節(jié)因素、禁欲時間等)。精液自身因素和季節(jié)因素等屬不可控因素，而本發(fā)明在可控的范圍內提供了一種超快速的冷凍方法，優(yōu)化了傳統(tǒng)的人類精液冷凍保存方法，并且可以用于凍存優(yōu)選處理后的精液和微量精液。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種人類精液的超快速冷凍保存體系，與傳統(tǒng)的冷凍保存體系相比，降低了冷凍保護劑的生物毒性，克服了操作時間長和方法復雜等缺點。

一種人類精液的超快速冷凍保存體系，包括冷凍保護劑、冷凍方法和解凍方法。其特征在于，采用本發(fā)明的冷凍保護劑與人類精液充分混合后，采用本發(fā)明的冷凍方法進行冷凍保存，并且采用本發(fā)明提供的解凍方法復蘇后，可以獲得與傳統(tǒng)冷凍方法更好的冷凍復蘇率，精子活力和前向運動的精子總數。

為實現上述目的，本發(fā)明提供如下的方法體系：一種人類精液超快速冷凍保存體系，包括如下步驟：

A、配置冷凍保護劑，將配置好的冷凍保護劑，或者凍存的已配置好的冷凍保護劑置于37℃水浴箱中預熱30分鐘；

B、將精液與本發(fā)明提供的冷凍保護劑，按照1:1的比例充分混合。

C、取清潔容器，容器內加入清潔液氮。將步驟B中混勻的精液與冷凍保護劑混合物在清潔液氮上方至少5厘米處，以每滴10-100微升的體積將混合物滴入清潔液氮中。

D、收集沉入清潔液氮中的凝固液滴，將其裝入普通凍存管中，液氮中保存。

E、將普通精液培養(yǎng)基裝入15毫升離心管，以35℃-42℃的溫度預熱培養(yǎng)基，作為解凍液。

F、將步驟D中的凝固液滴從普通凍存管中取出，投入預熱后的解凍液中，晃動至完全解凍。

G、將解凍液和凍存精液混合物離心去除上清后，沉淀精子可以直接用于臨床。

優(yōu)選地，步驟A中所述的冷凍保護劑，其特征在于：含有糖類、人血清白蛋白、甘氨酸和雙蒸水。保護劑組分均勻混合后，經過0.22微米的過濾器過濾后，可凍存于-20℃保存

優(yōu)選地，步驟A中所述冷凍保護劑含有的糖類可以是葡萄糖，蔗糖或者海藻糖之一。

優(yōu)選地，步驟A中所述冷凍保護劑若使用葡萄糖配制，葡萄糖的含量為每1毫升冷凍保護劑含有0.045克-0.108克。

優(yōu)選地，步驟A中所述冷凍保護劑若使用蔗糖配制，蔗糖的含量為每1毫升冷凍保護劑含有0.086克-0.205克。