[發明專利]通過內部標準物質譜檢測微生物的內標校正方法有效
| 申請號： | 201810346086.1 | 申請日： | 2016-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN108593753B | 公開（公告）日： | 2020-06-05 |
| 發明（設計）人： | 戰曉微;馬慶偉;宋召;譚甜霞 | 申請（專利權）人： | 北京毅新博創生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N27/62 | 分類號： | G01N27/62 |
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| 地址： | 102206 北京市昌平*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 通過 內部 標準 物質 檢測 微生物 校正 方法 | ||
1.一種通過試劑組合物用于飛行時間質譜系統鑒定微生物樣品的內標校正方法，步驟包括：
(1)用滅菌牙簽挑取部分合適的單菌落于裝有10μl組分I的離心管中，進行細胞破碎，蛋白及多肽釋放，裂解5分鐘；
(2)取上述裂解的溶液1μl加到靶板的孔位上，室溫干燥；
(3)取蛋白標準品1μl覆蓋到同一孔位上，自然干燥；
(4)打開組分II的微管，移取1μl組分II加到同一孔位上，自然干燥；
(5)靶板放入飛行時間質譜系統中進行檢測，其中通過比較內部標準物的待測分子量與實際分子量的差值，為待測微生物特征蛋白的分子量進行校正；
其中，該試劑組合物主要成分包括：組分I：乙腈和甲酸；組分II：乙腈，三氟乙酸和α-氰基-4-羥基肉桂酸；組分Ⅲ：1000Da平均分子量3000Da和12000Da平均分子量20000Da的內部標準物，
其中所述內部標準物選自1000Da平均分子量2000Da的多肽P(33507-63-0)和/或多肽P14R(syntheticpeptide)；和/或者，
其中所述內部標準物選自2000Da平均分子量3000Da的多肽ACTH fragment18-39(human)；
以及，其中所述內部標準物選自12000Da平均分子量180000Da的馬脫輔基肌紅蛋白Apomyoglobin(equine)。
2.如權利要求1所述的校正方法，其中組分I包括：體積百分濃度為50.0％的乙腈、體積百分濃度為35.0％的甲酸，余量為水；組分II包括：體積百分濃度為52.5％的乙腈、體積百分濃度為2.5％的三氟乙酸、15mg/ml的α-氰基-4-羥基肉桂酸，余量為水。
3.如權利要求1或2所述的校正方法，其中所述微生物檢測是確定微生物的屬、種、亞種或亞型；或是非診斷目的地檢測致病菌、污染菌、耐藥菌，或具有診斷目的的致病菌。
4.如權利要求3所述的校正方法，其中微生物是環境污染中的微生物、食品檢疫中的微生物、進出口商品中的微生物、藥物研究中耐藥性微生物，所述微生物包括原核微生物、真核微生物。
5.如權利要求4所述的校正方法，其中所述原核微生物包括細菌，所述真核微生物為真菌包括酵母菌、霉菌。
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