[發明專利]一種生殖冷凍用玻璃化冷凍試劑、試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201810344477.X
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108244102B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 嚴杰;喬杰;李蓉;劉平;鄭曉英;黃錦;莊新杰;李軍生;林勝利;袁一峰
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王闖

1.生殖冷凍用玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述玻璃化冷凍試劑包括細胞內玻璃化冷凍試劑和細胞外玻璃化冷凍試劑，其中：

所述細胞內玻璃化冷凍試劑包括跨膜載體和包裹在所述跨膜載體中的冷凍保護劑，所述冷凍保護劑的濃度為0.5~2M，選自糖類冷凍保護劑、糖醇類冷凍化保護劑或胺類冷凍保護劑；

所述玻璃化冷凍試劑還包括細胞外玻璃化冷凍試劑，所述細胞外玻璃化冷凍試劑包括冷凍保護劑，所述冷凍保護劑的濃度為2.5~3.5M，選自糖類冷凍保護劑、糖醇類冷凍保護劑、胺類冷凍保護劑或多聚物類冷凍保護劑，所述細胞外玻璃化冷凍試劑與所述細胞內玻璃化冷凍試劑單獨包裝；

所述細胞外玻璃化冷凍試劑中還包括石墨烯納米顆粒，其中所述石墨烯納米顆粒的表面包被有經超低粘度海藻酸或其衍生物交聯而形成的凝膠層，所述超低粘度海藻酸的cps為30~70，所述超低粘度海藻酸的衍生物為超低粘度海藻酸鈉。

2.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞內玻璃化冷凍試劑中，所述冷凍保護劑的濃度為0.5M、0.6M、0.7M、0.8M、0.9M、1.0M、1.1M、1.2M、1.3M、1.4M、1.5M、1.6M、1.7M、1.8M、1.9M、2.0M。

3.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞外玻璃化冷凍試劑中，所述冷凍保護劑的濃度為2.5M、2.6M、2.7M、2.8M、2.9M、3.0M、3.1M、3.2M、3.3M、3.4M或3.5M。

4.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞內玻璃化冷凍試劑或所述細胞外玻璃化冷凍試劑中：所述糖類冷凍保護劑選自單糖、二糖或三糖，所述單糖、二糖或三糖選自葡萄糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖。

5.根據權利要求4所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞內玻璃化冷凍試劑或所述細胞外玻璃化冷凍試劑中，所述糖類冷凍保護劑為葡萄糖。

6.根據權利要求4所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞內玻璃化冷凍試劑或所述細胞外玻璃化冷凍試劑中，所述糖醇類冷凍保護劑選自甘露糖醇或山梨醇。

7.根據權利要求4所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞內玻璃化冷凍試劑或所述細胞外玻璃化冷凍試劑中，所述胺類冷凍化保護劑選自脯氨酸、羥脯氨酸或甜菜堿。

8.根據權利要求7所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，在所述細胞內玻璃化冷凍試劑或所述細胞外玻璃化冷凍試劑中，所述胺類冷凍化保護劑為脯氨酸。

9.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述細胞外玻璃化冷凍試劑中的多聚物選自人血清蛋白、Ficoll、羥乙基淀粉、葡聚糖、聚乙烯二醇或聚乙烯吡咯烷酮。

10.根據權利要求9所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述多聚物為人血清蛋白。

11.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述跨膜載體選自脂質體、類脂囊泡、聚合物膠束。

12.根據權利要求10所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述跨膜載體為脂質體。

13.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述超低粘度海藻酸或超低粘度海藻酸鈉的cps為50。

14.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述石墨烯納米顆粒在細胞外玻璃化冷凍試劑中的質量分數為0.1~5%。

15.根據權利要求1所述的玻璃化冷凍試劑，其特征在于，所述石墨烯納米顆粒在細胞外玻璃化冷凍試劑中的質量分數為1%。