[發明專利]一種分離純化裸藻藻種的方法

有效

• 申請號: 201810344092.3
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108277163B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 王兆偉;彭小偉;王六偉
• 申請（專利權）人: 寧波浮田生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

1.一種分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、選取含有裸藻細胞的水樣或含有雜菌的裸藻藻液，接入按配好的營養鹽得到的無菌培養基后，用酸調節pH值至3-4，在調好的光強條件下培養，光強為3000lx，營養鹽包含的成分為：硝酸銨1g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，硫酸鎂0.1g/L，氯化鈣0.1g/L，檸檬酸鈉1g/L，VB110μg/L，VB12 0.1μg/L，氯化鐵0.588mg/L，氯化錳0.108mg/L，硫酸鋅0.078mg/L，氯化鈷0.012mg/L，鉬酸鈉0.0075mg/L；

B、步驟A得到的藻液經收集后進行稀釋，然后轉入新的滅菌培養裝置中；

C、將培養裝置的部分區域按給定量的光強施加照射，將培養裝置的一部分用不透光材料遮蓋，另外一部分施加3000lx的光強；光強處理時間為15min-2h；

D、取照光部位部分藻液，稀釋后，接種在培養孔板中進行培養，培養條件為：光照度2500lx，溫度22-25℃，光暗比L:D＝12h:12h，培養2-5d；

E、將培養孔板中的藻株進行鏡檢和菌類檢測，即可挑選出純種藻株。

2.如權利要求1所述的分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟A采用的酸為包括硫酸、鹽酸、硝酸或磷酸的無機酸，配置成1M濃度。

3.如權利要求2所述的分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟A中培養采用的光強為3000lx，在調好的光強條件下，以及在靜置處理或者通入空氣或混合氣體的條件下，培養2-7d。

4.如權利要求1所述的分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟B中，對藻液用無菌水或生理鹽水將藻細胞濃度稀釋成10-10³個/mL，培養裝置選用無菌試管或大培養皿。

5.如權利要求1所述的分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟D中，采用無菌培養基進行稀釋；藻液濃度稀釋成10-10³個/mL；從照光部位取液體50-300μl，接種于無菌培養孔板中。

6.一種如權利要求1-5任一項所述的分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、選取含有裸藻細胞的水樣或含有雜菌的裸藻藻液，加入營養鹽，其配方為：硝酸銨1g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，硫酸鎂0.1g/L，氯化鈣0.1g/L，檸檬酸鈉1g/L，VB1 10μg/L，VB120.1μg/L，氯化鐵0.588mg/L，氯化錳0.108mg/L，硫酸鋅0.078mg/L，氯化鈷0.012mg/L，鉬酸鈉0.0075mg/L，接入無菌培養基后，用酸調節pH值至3.5，在3000lx光強條件下，以及在靜置處理或者通入空氣或混合氣體的條件下，培養3d；

B、步驟A得到的藻液，經收集后進行稀釋，將藻細胞濃度稀釋成10-10²個/mL，隨后培養，培養裝置采用100mL試管；

C、將試管下部用不透光材料遮蓋，上部照射3000lx的光強15-30min；

D、從照光部位取50-100μL藻液，稀釋后，接種在培養孔板中進行培養，培養條件為：光照度2500lx，溫度22-25℃，光暗比L:D＝12h:12h，培養2-5d；

E、將培養孔板中的藻株進行鏡檢和菌類檢測，即可挑選出純種藻株。

7.如權利要求6所述的分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、選取含有裸藻細胞的水樣或含有雜菌的裸藻藻液，加入營養鹽，其配方為：硝酸銨1g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，硫酸鎂0.1g/L，氯化鈣0.1g/L，檸檬酸鈉1g/L，VB1 10μg/L，VB120.1μg/L，氯化鐵0.588mg/L，氯化錳0.108mg/L，硫酸鋅0.078mg/L，氯化鈷0.012mg/L，鉬酸鈉0.0075mg/L，接入無菌培養基后，用1M的HCl調節pH值至3.5，在3000lx光強條件下，通入含有CO₂ 5％的混合氣體培養3d，培養溫度為25±2℃；

B、步驟A得到的藻液，經收集后進行稀釋，將藻細胞濃度稀釋成10-10²個/mL，隨后培養，培養裝置采用100mL試管；

C、將試管下部用不透光材料遮蓋，上部照射3000lx的光強30min；

D、從照光部位取100μL藻液，稀釋后，接種在培養孔板中進行培養，培養條件為：光照度2500lx，溫度25℃，光暗比L:D＝12h:12h，培養3d；

E、將培養孔板中的藻株進行鏡檢和菌類檢測，即可挑選出純種藻株。