[發明專利]一種高活性林蛙抗氧化肽口服液及其制備方法

在審

• 申請號: 201810342537.4
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108541850A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 奚春宇;趙靜;張夢寒;熊文欣;康乃馨
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A23L2/02
• 分類號: A23L2/02;A23L2/52;A23L33/18;A23L33/105
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 朱世林;胡景陽

1.一種高活性林蛙抗氧化肽口服液，其特征在于按重量份計，由以下組分制備而成：

由0.1～0.6重量份分離出的高活性林蛙抗氧化肽，5～30重量份的澄清山楂汁，0.2～1.2重量份的檸檬酸，4～24重量份的蔗糖，50～90重量份的純凈水組成。

2.根據權利要求1所述的一種高活性林蛙抗氧化肽口服液的制備方法，至少包含以下步驟：

1)高活性林蛙抗氧化肽的制備：

(a)分離純化多肽樣液的配制

稱取林蛙多肽溶于超純水，配制成100mg/mL的多肽溶液，4℃保存，以備后用；

(b)凝膠色譜柱的制備

取SephadexG15凝膠干粉,加入凝膠干粉重量份8～12倍的超純水中溶解,于電加熱爐上煮沸直到充分溶脹，靜置冷卻至室溫，將凝膠溶脹液攪拌均勻，連續緩緩灌入層析柱中,注意無氣泡無斷層，使沉降的凝膠高度在層析柱的2/3～4/5長度，保持液面平整。以超純水為流動相,控制泵的流速在15～45mL/min,使柱子過夜平衡；

(c)進樣

調節泵的流速使床面以上的蒸餾水流出至剛好露出床面關掉泵，不要破壞柱子表面的平整，用注射器取沉降凝膠體積的1/50～1/20的多肽樣液，順著柱壁緩緩注入，待樣液進入床內緩緩往下滲入至床面重新露出，及時打開泵調節流速在5～10mL/min使超純水緩緩沿壁滑入柱內保證液面平整，注入超純水體積為整個層析柱體積的1/15～1/8后，調節泵自動進水洗脫，控制流進水流速為15～45mL/min；

(d)檢測與接樣

于測定蛋白的吸光度280nm波長處檢測其吸收峰，并且通過軟件顯示吸收峰，根據吸收峰可接到三組樣品；

(e)真空冷凍干燥

將三組不同吸收峰的樣液轉移置培養皿中，于-80℃冰箱中放置8小時，然后控制真空度為0.34Mpa，真空冷凍干燥24小時，制得分離純化粉制樣品，4℃冷藏保存，以備后用；

(f)抗氧化活性檢測

將分離得到的不同分子量的三個組分再分別進行DPPH清除率、還原力、羥自由基清除率及超氧陰離子清除率的測定，得到抗氧化活性最高的一個組分為高活性林蛙抗氧化多肽；

2)澄清山楂汁的制備

(a)水和原料預處理

蒸餾水用超濾凈水器過濾凈化，達到無菌、硬度小于5、無異味，選擇新鮮的山碴，充分清洗后浸泡6～10h再加熱煮沸0.5～2h，使山碴組織充分軟化；

(b)浸提工藝

將充分軟化的山楂組織剪碎，在浸提溫度50～90℃，浸提時間0.5～1.5h，料水比1:10～1:5的條件下，過濾得到的浸提液；

(c)過濾及離心

將浸提得到的山楂汁用200～500目濾布進行過濾，取過濾液于2000～5000r/min離心5～20分鐘，取上清液即得到澄清山楂汁；

3)口服液的制備

(a)混合調配

將0.1～0.6重量份的高活性林蛙抗氧化多肽粉，5～30重量份的山楂澄清液，0.2～1.2重量份的檸檬酸，4～24重量份的蔗糖，50～90重量份的純凈水，依次加入到混合容器中，攪拌均勻；

(b)罐裝殺菌冷卻

將所得的混合液殺菌、灌裝、冷卻，即得高活性林蛙抗氧化多肽口服液成品。