[發(fā)明專利]一種精氨酸脫亞胺酶注射劑及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810338891.X
• 申請(qǐng)日: 2018-04-16
• 公開（公告）號(hào): CN108324951B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛劍峰;范紅娟;單建華;郭映濤;鐘正明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 薛劍峰;江蘇康禾生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): A61K47/60
• 分類號(hào): A61K47/60;A61K38/50;A61K9/19;A61K9/08;A61P35/00
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

本發(fā)明提供一種精氨酸脫亞胺酶注射劑，其中，所述注射劑包含以下組分：濃度為5～20mg/ml的聚乙二醇修飾的精氨酸脫亞胺酶；濃度為1～300mM的醋酸鹽緩沖液；和濃度為0.1～9.0g/L的滲透壓調(diào)節(jié)劑NaCl；所述注射劑的pH為4.0～6.5。本發(fā)明的注射劑能保護(hù)聚乙二醇化精氨酸脫亞胺酶蛋白在水溶液中能長期穩(wěn)定，能夠保存較長時(shí)間且效價(jià)穩(wěn)定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，涉及一種精氨酸脫亞胺酶注射劑，本發(fā)明還涉及所述精氨酸脫亞胺酶注射劑的制備方法。

背景技術(shù)

精氨酸是一種可以在哺乳動(dòng)物體內(nèi)自然產(chǎn)生的非必需氨基酸，它參與組織細(xì)胞蛋白質(zhì)、尿素、肌酸、肌酐、一氧化氮(NO)、谷氨酰胺、嘧啶等的合成。正常的細(xì)胞可以依賴精氨酰琥珀酸合成酶利用瓜氨酸合成精氨酸。然而在某些腫瘤細(xì)胞，如肝癌細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞中，精氨酰琥珀酸合成酶通路缺失，無法自身合成精氨酸，只能依賴外源的精氨酸存活，而當(dāng)外源精氨酸缺乏時(shí)，腫瘤細(xì)胞就會(huì)被“餓死”，增殖受到抑制。這一特點(diǎn)為治療精氨酸依賴的腫瘤提供了新思路，即通過降低血清中精氨酸的水平、阻斷外源精氨酸供給，造成腫瘤細(xì)胞營養(yǎng)缺乏，實(shí)現(xiàn)特異性的抑制腫瘤細(xì)胞增殖。精氨酸脫亞胺酶(Arginine Deiminase，ADI)是一類具有水解精氨酸活性的蛋白酶。ADI存在廣泛，包括產(chǎn)氣莢膜索狀芽孢桿菌、惡臭假單胞菌、人型支原體、精氨酸支原體等均能合成ADI蛋白。但對(duì)于臨床應(yīng)用而言，這些微生物來源的ADI屬于異源蛋白，直接應(yīng)用于人體會(huì)產(chǎn)生中和抗體，造成半衰期短、活性下將及免疫反應(yīng)等不良后果。為了克服這一缺陷，美國Polaris制藥公司開發(fā)了聚乙二醇修飾的ADI(ADI-PEG)，使用分子量為20kDa的SS-PEG對(duì)重組表達(dá)的ADI進(jìn)行修飾，修飾后的分子很好地保持了酶的活性，同時(shí)封閉了抗原表位，中和抗體產(chǎn)生的水平也顯著下降。此外，ADI-PEG分子的半衰期也由修飾前的4-5個(gè)小時(shí)延長至5-7天。目前，ADI-PEG正在進(jìn)行肝癌、間脾瘤的臨床試驗(yàn)，顯示了良好的臨床效果和應(yīng)用前景。但是，作為一個(gè)多位點(diǎn)PEG修飾的重組酶蛋白，ADI-PEG藥物的開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化需要解決儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用過程中酶活性損失、PEG脫落等影響藥效和質(zhì)量的關(guān)鍵因素。這就需要對(duì)不同的制劑處方進(jìn)行比較和研究，篩選能夠最大限度保持活性和蛋白分子狀態(tài)的處方組成。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是通過對(duì)酶活性和PEG脫落兩個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)的檢測(cè)，對(duì)ADI-PEG的制劑處方進(jìn)行更多和范圍更大的篩選，提供一種可以長時(shí)間保持蛋白穩(wěn)定性和活性、更適合臨床應(yīng)用的制劑處方組成。本發(fā)明的注射劑由長效精氨酸脫亞胺酶、緩沖液和滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。本發(fā)明提供的精氨酸脫亞胺酶注射劑有效地避免了精氨酸脫亞胺酶由于鹽、pH和溫度的影響而導(dǎo)致地物理變化和化學(xué)變化。

一方面，本發(fā)明提供了一種精氨酸脫亞胺酶注射劑，其中，所述注射劑包含以下組分：

濃度為5～20mg/ml的聚乙二醇修飾的精氨酸脫亞胺酶；

濃度為1～300mM的醋酸鹽緩沖液；和

濃度為0.1～9.0g/L的滲透壓調(diào)節(jié)劑NaCl；

所述注射劑的pH為4.0～6.5。

優(yōu)選地，所述聚乙二醇為20kDa的SS-PEG(聚乙二醇二琥珀酰亞胺琥珀酸酯)

根據(jù)治療有效量確定聚乙二醇修飾的精氨酸脫亞胺注射劑的濃度，優(yōu)選地，所述聚乙二醇修飾的精氨酸脫亞胺酶注射劑為肌肉注射劑，所述肌肉注射劑中聚乙二醇修飾的精氨酸脫亞胺酶濃度為9～13mg/ml；

優(yōu)選地，所述肌肉注射劑的注射量為3.8ml。

優(yōu)選地，所述醋酸鹽緩沖液的濃度為2～100mM，更優(yōu)選地為5～20mM，進(jìn)一步優(yōu)選地為10mM。

優(yōu)選地，所述注射劑的pH為6.0。

優(yōu)選地，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑NaCl的濃度為6.0～9.0g/L，更優(yōu)選地為7.5g/L。