[發(fā)明專利]一種Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞再生的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810338829.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108524936B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羋肖肖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州師范大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K45/00
• 分類號(hào): A61K45/00;A61K31/18;A61P27/16;C12Q1/6888;C12Q1/686;G01N15/00;G01N15/10;G01N15/14
• 代理公司: 昆明合眾智信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 53113
• 代理人: 錢磊

本發(fā)明公開(kāi)了一種Wnt/β?catenin信號(hào)通路影響斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞再生的方法，所述方法通過(guò)流式細(xì)胞分選斑馬魚(yú)側(cè)線神經(jīng)丘助細(xì)胞、熒光定量PCR、整胚原位雜交以及外源添加Wnt/β?catenin信號(hào)通路小分子化合物抑制劑和增強(qiáng)劑的方法，觀察順鉑誘導(dǎo)毛細(xì)胞損傷過(guò)程中Wnt/β?catenin信號(hào)通路各因子的時(shí)空表達(dá)情況及毛細(xì)胞再生情況變化，對(duì)模式動(dòng)物斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞再生進(jìn)行影響，Wnt/β?catenin信號(hào)因子在順鉑誘導(dǎo)毛細(xì)胞死亡過(guò)程中表達(dá)量升高，包括配體wnt2、wnt3a及關(guān)鍵因子ctnnb1在側(cè)線神經(jīng)丘助細(xì)胞類群表達(dá)量升高；dkk1a和dkk2在助細(xì)胞類群表達(dá)量降低，這說(shuō)明了在毛細(xì)胞死亡時(shí)，Wnt/β?catenin信號(hào)通路活化。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞再生的方法。

背景技術(shù)

Wnt/β-catenin信號(hào)通路即Wingless-Int(Wnt)/β-catenin信號(hào)通路，是公認(rèn)的細(xì)胞增殖和分化調(diào)節(jié)因子。在Wnt/β-catenin信號(hào)通路中，Wnts配體結(jié)合Frizzled受體和Lrp5/Lrp6輔助受體后通過(guò)招募Dishevelled活化受體復(fù)合物，解聚β-catenin降解復(fù)合體(GSK3β起主要調(diào)節(jié)作用)后，最終使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)累積并進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF一起激活下游因子表達(dá)。Kawakami等發(fā)現(xiàn)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路導(dǎo)致斑馬魚(yú)、美西螈、非洲爪蟾和雞等脊椎動(dòng)物肢體再生障礙。Wnt/β-catenin信號(hào)通路同樣控制著斑馬魚(yú)視網(wǎng)膜再生前體細(xì)胞的增殖。當(dāng)用新霉素殺死斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞后，增強(qiáng)Wnt/β-catenin信號(hào)通路顯著增加側(cè)線神經(jīng)丘助細(xì)胞增殖和毛細(xì)胞形成。但是目前仍缺少對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)在毛細(xì)胞再生程序啟動(dòng)早期的關(guān)注。

順鉑的抗腫瘤作用發(fā)現(xiàn)30余年以來(lái)，其同后來(lái)衍生出的鉑類化合物成為抗腫瘤治療的一線用藥。但是順鉑類化合物的耳毒性也是有目共睹的。研究者通過(guò)大樣本數(shù)據(jù)回歸分析發(fā)現(xiàn)，5歲以下的兒童尤其對(duì)順鉑誘發(fā)的耳聾敏感，當(dāng)順鉑累積使用量達(dá)400mg/m²后，40％5歲以下兒童癌癥患者表現(xiàn)出中度至重度的聽(tīng)力丟失，而年齡在15-20歲的對(duì)照組僅有5％表現(xiàn)出聽(tīng)力丟失的現(xiàn)象。目前研究認(rèn)為在癌細(xì)胞和毛細(xì)胞中，順鉑可和DNA堿基共價(jià)結(jié)合，引起DNA鏈內(nèi)或鏈間交聯(lián)，誘發(fā)細(xì)胞凋亡。因此建立符合臨床特點(diǎn)的順鉑損傷毛細(xì)胞模型是探究順鉑誘發(fā)聽(tīng)力障礙治療的基礎(chǔ)。

斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞可被多種耳毒性藥物殺死，研究發(fā)現(xiàn)，氨基糖苷類抗生素、順鉑類治癌藥物和重金屬離子銅等都可特異性的殺死側(cè)線毛細(xì)胞。對(duì)氨基糖苷類藥物來(lái)說(shuō)，目前研究認(rèn)為它們可以引起線粒體腫脹和胞內(nèi)Ca²⁺濃度的瞬時(shí)增加。重金屬離子銅離子以細(xì)胞凋亡和壞死結(jié)合的方式殺死側(cè)線毛細(xì)胞。順鉑類藥物在殺死側(cè)線毛細(xì)胞過(guò)程中可使毛細(xì)胞的細(xì)胞核固縮，斷裂成核小片段。我們前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，順鉑在殺死斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞過(guò)程中可引起Caspase-3活化，這說(shuō)明順鉑是通過(guò)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)毛細(xì)胞死亡。Piotrowski和Hudspeth研究組分別利用分選的斑馬魚(yú)側(cè)線神經(jīng)丘助細(xì)胞類群進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因不參與新霉素和硫酸銅誘導(dǎo)毛細(xì)胞死亡后的助細(xì)胞早期響應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種能夠影響斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞再生的方法，本發(fā)明所解決技術(shù)問(wèn)題是提供一種Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響斑馬魚(yú)側(cè)線毛細(xì)胞再生的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：