[發明專利]一種ESCRT-III核心亞基Snf7類雙鏈RNA及其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810332093.6
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN108707603B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 張文慶;黎丹
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;A01N57/16;A01P7/04
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 劉婉

本發明提供了一種ESCRT?III核心亞基Snf7類雙鏈RNA，其轉錄模板的正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

技術領域

本發明屬于昆蟲控制領域，具體涉及一種轉運必需體分選復合物III核心亞基Snf7類的雙鏈RNA(dsRNA)，以及該dsRNA的制備方法和應用。

背景技術

ESCRT-Ⅲ，稱為轉運必需體分選復合物Ⅲ(the endosomal sorting complexesrequired for transport-III)主要由Vps20、Snf7/Vps32、Vps24和Vps2四個“核心”亞基組成，是真核細胞中完成內體膜內陷以形成多囊泡體(MVB)的關鍵組分。ESCRT-Ⅲ的主要功能是募集去泛素化(de-ubiquitin)的酶，促進被泛素(ubiquitin)標記的膜蛋白的降解。除了參與MVB的形成外，ESCRT-III還與細胞跨膜蛋白的內化、轉運、分選、細胞自噬和細胞分裂等細胞生命活動有關，而這些生命過程又與MVB形成過程密切相關(Babst等，2002；Res等，2007；Capalbo等，2012；Tang等，2015)。因此，ESCRT-III對于所有真核生物的生長發育均有重要的作用。

Snf7屬于進化保守的蛋白質家族，在酵母中是由240個氨基酸組成，在果蠅中的同系物為Shrb(Shrub)，在人類的同系物為CHMP4，其存在于除古細菌外的其它任何物種(Babst等，2002；McMillan等，2016)。Snf7是一種可溶性卷曲螺旋蛋白，含有高度結構化的“四核”螺旋結構域。Snf7的功能包括：1)自噬；2)與去泛素酶的相互作用(DUB)招募DUB到ESCRT途徑；3)多囊泡體內腔內囊泡(ILV)形成MVB；4)細胞分裂(Lata等，2008；Obita等，2007；Ramaseshadri等，2013；等，2014)。

Snf7雖為絕大部分生物生命活動中的必需蛋白，但在昆蟲中的研究還較少，其中以果蠅和西方玉米根甲蟲(western cornrootworm，WCR，Diabrotica virgiferavirgifera)中的研究最多。Sweeney等通過對果蠅Shrub(即果蠅的Snf7)突變體的研究，發現Shrb在昆蟲的神經形態發生中發揮重要作用(Sweeney等，2006)。Baum等通過西方玉米根甲蟲的RNAi實驗，發現極低劑量的dsDvSnf7就可導致WCR致死(Baum等，2007)。隨后Bolognesi等通過RNAi技術干涉WCR幼蟲中的Snf7基因的表達，發現試驗組幼蟲相于對照組生長明顯被阻礙，且分別以50ng/ml和1000ng/ml的劑量飼喂幼蟲24h后會造成90.3％和94.6％的致死率(Bolognesi等，2012)。對玉米根甲蟲飼喂dsDvSnf7后，發現泛素化蛋白在幼蟲組織中積累，阻礙了中腸和脂肪體的細胞自噬而導致幼蟲死亡(Ramaseshadri等，2013)。

目前，針對昆蟲殺蟲劑的研究較多，但主要集中的是昆蟲特有基因，如:蛻皮激素受體(Ecdysone receptor，EcR)和幾丁質合成酶(chitin synthase，CHS)(Wu等，2012；Wang等，2012)。這些殺蟲劑的主要優點是針對大部分昆蟲，是一種寬譜殺蟲劑，但其相對安全性不高，且對昆蟲的致死效率有限，這極大地限制了昆蟲特有基因殺蟲劑的使用。由于Snf7對昆蟲生長發育起至關重要的作用，已有研究者通過設計特異性片段，獲得了高效安全的僅針對西方玉米根甲蟲的窄譜殺蟲劑。通過對褐飛虱Snf7這一管家基因進行特異性片段設計，將有助于我們篩選到新的針對褐飛虱的高效安全的窄譜殺蟲劑。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點和不足，提供一種針對褐飛虱防治效果顯著的高效安全性殺蟲dsRNA。

本發明的另一個目的是提供所述高效安全性殺蟲dsRNA的制備方法。

本發明的再一個目的是提供所述高效安全性殺蟲dsRNA在制備用于防治褐飛虱的藥物中的應用。

本發明的又一個目的是提供使用所述高效安全性殺蟲dsRNA防治褐飛虱的方法。