[發(fā)明專利]基于CRISPR-鏈取代的等溫擴增及檢測技術(shù)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810328785.3
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN108588182A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 喻學(xué)鋒;周文華;胡麗
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

1.一種基于CRISPR-鏈取代的等溫擴增試劑盒，包括鏈取代等溫擴增試劑，其特征在于：試劑盒還包括了野生型Cas9和/或核酸酶缺陷的Cas9切口酶、特異性識別目標(biāo)DNA序列上下游的sgRNA對，鏈取代等溫擴增反應(yīng)的擴增引物對，該引物對與Cas9-sgRNA復(fù)合體對與目的基因結(jié)合后暴露出的單鏈區(qū)域互補。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的等溫擴增試劑盒，其特征在于：核酸酶缺陷的Cas9切口酶為HNH核酸酶缺陷的Cas9切口酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的等溫擴增試劑盒，其特征在于：sgRNA對的識別位點分別為目的序列上游CCN序列3’端的10～30個核苷酸序列和下游NGG序列5’端的10～30個核苷酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的等溫擴增試劑盒，其特征在于：鏈取代等溫擴增試劑的DNA引物具有如下特征：該引物5’端包含了一個切口酶識別位點，且該位點的酶切位點在其互補鏈上；該引物的中段與Cas-sgRNA復(fù)合體所識別的靶DNA區(qū)域的NGG序列所在鏈的至少10個連續(xù)核苷酸互補配對。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的等溫擴增試劑盒，其特征在于：鏈取代等溫擴增試劑的DNA引物的3’端包含了一段1～10個核苷酸的與NGG序列所在鏈核苷酸互補的序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的等溫擴增試劑盒，其特征在于：sgRNA對識別位點的間距100～1000bp，優(yōu)選100～250bp，識別位點5’端以CCN為起點，3’端靶序列以NGG為終點。

7.一種基于CRISPR-鏈取代的核酸檢測試劑盒，其特征在于：包括權(quán)利要求1～6任一項所述的等溫擴增試劑盒，以及核酸定量分析試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于：核酸定量分析試劑選自特異性分子信標(biāo)分子。

9.基于CRISPR-鏈取代的等溫擴增方法，包括如下步驟：

1)獲取待測樣品核酸；

2)使用權(quán)利要求1～6任一項等溫擴增試劑盒含有的試劑對待測核酸樣品進行擴增。

10.基于CRISPR-鏈取代的等溫擴增檢測方法，包括如下步驟：

1)獲取待測樣品核酸；

2)使用權(quán)利要求1～6任一項等溫擴增試劑盒含有的試劑對待測核酸樣品進行擴增；

3)對擴增產(chǎn)物進行分析，確定檢測結(jié)果。