[發(fā)明專利]桑源陰溝腸桿菌特異序列和引物組Yt4及其在檢測(cè)陰溝腸桿菌方面的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810326627.4
• 申請(qǐng)日: 2018-04-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108441569B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉吉平;楊宏宇;孫勛勛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

本發(fā)明公開(kāi)了一段桑源陰溝腸桿菌特異序列和引物組Yt4及其在陰溝腸桿菌分子檢測(cè)方面的應(yīng)用。所述特異序列如SEQ ID NO.1所示，引物組Yt4包括引物Yt4?FIP、Yt4?BIP、Yt4?F3、Yt4?B3，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.2～5所示?；谒鎏禺愋蛄锌梢蕴禺愋缘臋z測(cè)陰溝腸桿菌，尤其是快速區(qū)分其它桑樹(shù)病害，在陰溝腸桿菌的實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中具有重要的技術(shù)支撐價(jià)值和應(yīng)用前景。所述引物組Yt4及構(gòu)建的方法和試劑盒，使用方便，適用擴(kuò)增模板非常多樣，且檢測(cè)結(jié)果可靠、特異性強(qiáng)、靈敏度高、可視化，在陰溝腸桿菌枯萎病的早期檢測(cè)、快速檢測(cè)方面有很好的效果，對(duì)?？菸『Φ谋O(jiān)控、預(yù)防和控制方面，具有很好的實(shí)際推廣應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病原生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一段桑源陰溝腸桿菌特異序列和引物組Yt4及其在陰溝腸桿菌分子檢測(cè)方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)是腸桿菌屬中研究發(fā)現(xiàn)最多的一種植物病原，是一種條件致病菌，在高溫高濕的條件下，使寄主致病。如陰溝腸桿菌導(dǎo)致榆樹(shù)濕心病(1945)、椰子萎蔫?。?976）、番木瓜果內(nèi)黃化病（1987）洋蔥腐爛病(1990)等；另外在中國(guó)的桑樹(shù)中，陰溝腸桿菌菌群是桑腸桿菌枯萎病又稱?？菸〉闹虏【╓ang et al，2010），是桑樹(shù)的一種重要病害，近年來(lái)在華南蠶區(qū)桑園普遍發(fā)生，其發(fā)病速度快，蔓延迅速，對(duì)蠶桑業(yè)生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的損失。

由于陰溝腸桿菌屬寄主種類繁多、來(lái)源復(fù)雜，使?？菸〉臋z測(cè)和鑒別一直成為桑業(yè)研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。同時(shí)，?？菸〉暮笃诓≌髋c桑青枯病癥狀相似進(jìn)一步增加了?？菸z測(cè)和鑒別的難度。

目前，?？菸z測(cè)技術(shù)主要是采用傳統(tǒng)的分離技術(shù)和PCR技術(shù)，耗時(shí)長(zhǎng)，效率低，敏感度也較低。因此，開(kāi)展對(duì)?？菸〉目焖僭\斷技術(shù)研究，為系統(tǒng)預(yù)防和控制?？菸√峁┲匾夹g(shù)依據(jù)，提高桑樹(shù)檢疫的質(zhì)量，對(duì)?？菸〉姆乐尉哂兄匾目茖W(xué)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有陰溝腸桿菌以及?？菸〉臋z測(cè)診斷技術(shù)的缺陷和不足，提供了一段桑源陰溝腸桿菌特異序列，并基于該序列設(shè)計(jì)了一組陰溝腸桿菌分子的檢測(cè)引物組，而基于所述引物組可建立用于陰溝腸桿菌枯萎病的LAMP檢測(cè)產(chǎn)品和方法，能夠準(zhǔn)確全面地判斷樣品是否含有陰溝腸桿菌分子，從而實(shí)現(xiàn)桑枯萎病的預(yù)測(cè)監(jiān)控和防范，在陰溝腸桿菌分子的實(shí)際檢測(cè)以及制備檢測(cè)陰溝腸桿菌分子相關(guān)產(chǎn)品中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和重要意義。

本發(fā)明的目的是提供一段桑源陰溝腸桿菌特異序列。

本發(fā)明另一目的是提供一組檢測(cè)陰溝腸桿菌的LAMP引物組Yt4。

本發(fā)明再一目的是提供所述特異序列及引物組Yt4在陰溝腸桿菌分子檢測(cè)方面的應(yīng)用。

本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明首先提供了一段桑源陰溝腸桿菌特異序列，如SEQ ID NO.1所示。

以該序列為靶標(biāo)可以特異性的檢測(cè)出陰溝腸桿菌，可用于?？菸〉臋z測(cè)診斷。因此所述特異序列在檢測(cè)陰溝腸桿菌或?？菸》矫娴膽?yīng)用，以及能特異性所述特異序列的引物組，均應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了一組檢測(cè)陰溝腸桿菌或?？菸〉腖AMP引物組Yt4，包括引物Yt4-FIP、Yt4-BIP、Yt4-F3、Yt4-B3，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.2～5所示。

所述引物組Yt4在檢測(cè)陰溝腸桿菌或?？菸》矫娴膽?yīng)用或在制備陰溝腸桿菌或?？菸〉臋z測(cè)產(chǎn)品方面的應(yīng)用，也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

基于該引物組，本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)陰溝腸桿菌或?？菸〉姆椒ǎ且源郎y(cè)樣品DNA為模板，利用權(quán)利要求4所述引物組Yt4進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增或熒光恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷待測(cè)樣品中是否含有陰溝腸桿菌。