[發(fā)明專利]桑源陰溝腸桿菌特異序列和引物組Yt4及其在檢測陰溝腸桿菌方面的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810326627.4
• 申請日: 2018-04-12
• 公開（公告）號: CN108441569B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉吉平;楊宏宇;孫勛勛
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種檢測陰溝腸桿菌或檢測陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病的引物組，其特征在于，該引物組能特異性的擴增如SEQ ID NO.1所示的序列；所述引物組為引物組Yt4，由引物Yt4-FIP、Yt4-BIP、Yt4-F3、Yt4-B3組成，其中Yt4-F3、Yt4-B3、Yt4-FIP、Yt4-BIP核苷酸序列依次如SEQ ID NO.2～5所示。

2.權(quán)利要求1所述引物組Yt4在非診斷目的檢測陰溝腸桿菌方面的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述引物組Yt4在檢測陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病方面的應(yīng)用或在制備陰溝腸桿菌或陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病的檢測產(chǎn)品方面的應(yīng)用。

4.一種檢測陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病或者非診斷目的的檢測陰溝腸桿菌的方法，其特征在于，以待測樣品DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述引物組Yt4進(jìn)行恒溫擴增反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷待測樣品中是否含有陰溝腸桿菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于，所述恒溫擴增反應(yīng)為熒光恒溫擴增反應(yīng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，反應(yīng)結(jié)果的判斷方法為：熒光擴增出現(xiàn)S型曲線則待測樣品中含有陰溝腸桿菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述方法，其特征在于，所述擴增反應(yīng)的條件為62～64℃反應(yīng)55～65 min；擴增反應(yīng)體系為：2×反應(yīng)緩沖液 12.5μL，40μmol/L外引物Yt4-F3 0.5μL，10μmol/L外引物Yt4-B3 0.5μL，40μmol/L內(nèi)引物Yt4-FIP 1μL，40μmol/L內(nèi)引物Yt4- BIP 1μL，8U/μL Bst DNA聚合酶1μL，樣品DNA 2μL，ddH₂O補足至 25 μL。

8.一種檢測陰溝腸桿菌或陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述引物組Yt4。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，還含有2×反應(yīng)緩沖液、Bst DNA聚合酶、陽性質(zhì)粒、密封液、無菌水和顯示液。