[發(fā)明專利]桑源陰溝腸桿菌特異序列和引物組Yt4及其在檢測(cè)陰溝腸桿菌方面的應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810326627.4 | 申請(qǐng)日: | 2018-04-12 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN108441569B | 公開(kāi)(公告)日: | 2021-10-29 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 劉吉平;楊宏宇;孫勛勛 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C12Q1/689 | 分類號(hào): | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司: | 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102 | 代理人: | 林麗明 |
| 地址: | 510642 廣*** | 國(guó)省代碼: | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書(shū): | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū): | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 陰溝 桿菌 特異 序列 引物 yt4 及其 檢測(cè) 方面 應(yīng)用 | ||
1.一種檢測(cè)陰溝腸桿菌或檢測(cè)陰溝腸桿菌導(dǎo)致的??菸〉囊锝M,其特征在于,該引物組能特異性的擴(kuò)增如SEQ ID NO.1所示的序列;所述引物組為引物組Yt4,由引物Yt4-FIP、Yt4-BIP、Yt4-F3、Yt4-B3組成,其中Yt4-F3、Yt4-B3、Yt4-FIP、Yt4-BIP核苷酸序列依次如SEQ ID NO.2~5所示。
2.權(quán)利要求1所述引物組Yt4在非診斷目的檢測(cè)陰溝腸桿菌方面的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述引物組Yt4在檢測(cè)陰溝腸桿菌導(dǎo)致的??菸》矫娴膽?yīng)用或在制備陰溝腸桿菌或陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病的檢測(cè)產(chǎn)品方面的應(yīng)用。
4.一種檢測(cè)陰溝腸桿菌導(dǎo)致的桑枯萎病或者非診斷目的的檢測(cè)陰溝腸桿菌的方法,其特征在于,以待測(cè)樣品DNA為模板,利用權(quán)利要求1所述引物組Yt4進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷待測(cè)樣品中是否含有陰溝腸桿菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法,其特征在于,所述恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)為熒光恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法,其特征在于,反應(yīng)結(jié)果的判斷方法為:熒光擴(kuò)增出現(xiàn)S型曲線則待測(cè)樣品中含有陰溝腸桿菌。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述方法,其特征在于,所述擴(kuò)增反應(yīng)的條件為62~64℃反應(yīng)55~65 min;擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2×反應(yīng)緩沖液 12.5μL,40μmol/L外引物Yt4-F3 0.5μL,10μmol/L外引物Yt4-B3 0.5μL,40μmol/L內(nèi)引物Yt4-FIP 1μL,40μmol/L內(nèi)引物Yt4- BIP 1μL,8U/μL Bst DNA聚合酶1μL,樣品DNA 2μL,ddH2O補(bǔ)足至 25 μL。
8.一種檢測(cè)陰溝腸桿菌或陰溝腸桿菌導(dǎo)致的??菸〉脑噭┖?,其特征在于,含有權(quán)利要求1所述引物組Yt4。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒,其特征在于,還含有2×反應(yīng)緩沖液、Bst DNA聚合酶、陽(yáng)性質(zhì)粒、密封液、無(wú)菌水和顯示液。
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